隨著越來越多的轉(zhuǎn)基因作物及其制品進(jìn)入市場(chǎng),勢(shì)必會(huì)對(duì)其安全監(jiān)管體系提出更高的要求。近年來恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)的快速發(fā)展促進(jìn)了RPA擴(kuò)增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)中的應(yīng)用,RPA技術(shù)良好的性能、簡單的操作、便捷的設(shè)備、低廉的價(jià)格,迅速引起高度關(guān)注及開發(fā)研究熱潮,可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的檢測(cè)設(shè)備。本實(shí)驗(yàn)旨在利用實(shí)時(shí)熒光RPA擴(kuò)增技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品快速檢測(cè),并為其他檢測(cè)體系的建立提供參考。本研究主要有以下三部分實(shí)驗(yàn)構(gòu)成:實(shí)驗(yàn)一為了實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因作物及產(chǎn)品的初步快速篩查,通過ISAAA Briefs發(fā)布的數(shù)據(jù)分析,挑選出4種應(yīng)用最廣泛的轉(zhuǎn)基因通用元件CaMV35s、BT、NOS、PAT,根據(jù)轉(zhuǎn)基因通用元件特異性序列設(shè)計(jì)引物與探針,結(jié)合凍干粉技術(shù)建立6連管實(shí)時(shí)熒光RPA快速篩查體系。該體系具有較高的特異性和靈敏度,能有效的檢出最低48拷貝數(shù)的模板。對(duì)實(shí)際樣品的篩查中,篩查結(jié)果穩(wěn)定可靠,在轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)二為了實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆MON89788品系檢測(cè),根據(jù)其轉(zhuǎn)化體特異性序列設(shè)計(jì)引物與探針,建立了轉(zhuǎn)基因大豆MON89788的RPA實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法,并就影響RPA擴(kuò)增的關(guān)鍵因子,如最佳引物的... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1 轉(zhuǎn)基因作物概述
        1.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理及發(fā)展現(xiàn)狀
        1.2 轉(zhuǎn)基因作物的爭(zhēng)議
        1.3 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展
    2 重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)的研究及應(yīng)用進(jìn)展
        2.1 重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)的基本原理
        2.2 技術(shù)發(fā)展
        2.3 RPA 的技術(shù)優(yōu)勢(shì)與需要改善之處
        2.4 應(yīng)用與展望
    3 本硏究的目的和意義
第2章 實(shí)時(shí)熒光RPA技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因通用元件快速篩查
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 實(shí)時(shí)熒光RPA引物特異性結(jié)果
        2.2 檢測(cè)限試驗(yàn)
        2.3 實(shí)際樣本的檢測(cè)
    3 討論
    4 本章小結(jié)
第3章 轉(zhuǎn)基因大豆MON89788 實(shí)時(shí)熒光重組酶聚合酶擴(kuò)增檢測(cè)方法的建立
    1.材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 方法
    2.結(jié)果與分析
        2.1 實(shí)時(shí)熒光RPA引物篩選結(jié)果
        2.2 實(shí)時(shí)熒光 RPA 條件優(yōu)化
        2.3 特異性試驗(yàn)
        2.4 靈敏度與檢測(cè)限試驗(yàn)
        2.5 數(shù)據(jù)分析
        2.6 實(shí)際樣品的檢測(cè)
    3 討論
    4 本章小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)基因玉米MON863 實(shí)時(shí)熒光重組酶聚合酶擴(kuò)增檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 DNA 提取
            1.3.2 引物和探針
            1.3.3 實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)和RPA反應(yīng)
            1.3.4 引物的篩查
            1.3.5 反應(yīng)條件優(yōu)化
            1.3.6 特異性和靈敏度實(shí)驗(yàn)
            1.3.7 RT-RPA用于實(shí)際樣品的快速檢測(cè)
    2 結(jié)果和討論
        2.1 引物與探針的篩查
        2.2 反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.3 RT-RPA的特異性和靈敏度
        2.4 使用RT-RPA用于實(shí)際樣品快速檢測(cè)
    3 討論
    4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    英文縮略詞表
    碩士期間發(fā)表論文及科研情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]食品中轉(zhuǎn)基因成分的定量檢測(cè)研究[D]. 吳永彬.南方醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3732580