發(fā)布時間：2023-01-28 12:12

　　隨著越來越多的轉(zhuǎn)基因作物及其制品進入市場,勢必會對其安全監(jiān)管體系提出更高的要求。近年來恒溫核酸擴增技術(shù)的快速發(fā)展促進了RPA擴增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測中的應(yīng)用,RPA技術(shù)良好的性能、簡單的操作、便捷的設(shè)備、低廉的價格,迅速引起高度關(guān)注及開發(fā)研究熱潮,可以真正實現(xiàn)便攜式的檢測設(shè)備。本實驗旨在利用實時熒光RPA擴增技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品快速檢測,并為其他檢測體系的建立提供參考。本研究主要有以下三部分實驗構(gòu)成:實驗一為了實現(xiàn)對轉(zhuǎn)基因作物及產(chǎn)品的初步快速篩查,通過ISAAA Briefs發(fā)布的數(shù)據(jù)分析,挑選出4種應(yīng)用最廣泛的轉(zhuǎn)基因通用元件CaMV35s、BT、NOS、PAT,根據(jù)轉(zhuǎn)基因通用元件特異性序列設(shè)計引物與探針,結(jié)合凍干粉技術(shù)建立6連管實時熒光RPA快速篩查體系。該體系具有較高的特異性和靈敏度,能有效的檢出最低48拷貝數(shù)的模板。對實際樣品的篩查中,篩查結(jié)果穩(wěn)定可靠,在轉(zhuǎn)基因成分檢測中具有廣泛的應(yīng)用價值。實驗二為了實現(xiàn)對轉(zhuǎn)基因大豆MON89788品系檢測,根據(jù)其轉(zhuǎn)化體特異性序列設(shè)計引物與探針,建立了轉(zhuǎn)基因大豆MON89788的RPA實時熒光檢測方法,并就影響RPA擴增的關(guān)鍵因子,如最佳引物的... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1 轉(zhuǎn)基因作物概述
        1.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理及發(fā)展現(xiàn)狀
        1.2 轉(zhuǎn)基因作物的爭議
        1.3 轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)的研究進展
    2 重組酶聚合酶擴增技術(shù)的研究及應(yīng)用進展
        2.1 重組酶聚合酶擴增技術(shù)的基本原理
        2.2 技術(shù)發(fā)展
        2.3 RPA 的技術(shù)優(yōu)勢與需要改善之處
        2.4 應(yīng)用與展望
    3 本硏究的目的和意義
第2章 實時熒光RPA技術(shù)對轉(zhuǎn)基因通用元件快速篩查
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 實時熒光RPA引物特異性結(jié)果
        2.2 檢測限試驗
        2.3 實際樣本的檢測
    3 討論
    4 本章小結(jié)
第3章 轉(zhuǎn)基因大豆MON89788 實時熒光重組酶聚合酶擴增檢測方法的建立
    1.材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實驗儀器
        1.3 方法
    2.結(jié)果與分析
        2.1 實時熒光RPA引物篩選結(jié)果
        2.2 實時熒光 RPA 條件優(yōu)化
        2.3 特異性試驗
        2.4 靈敏度與檢測限試驗
        2.5 數(shù)據(jù)分析
        2.6 實際樣品的檢測
    3 討論
    4 本章小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)基因玉米MON863 實時熒光重組酶聚合酶擴增檢測方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗方法
            1.3.1 DNA 提取
            1.3.2 引物和探針
            1.3.3 實時PCR反應(yīng)和RPA反應(yīng)
            1.3.4 引物的篩查
            1.3.5 反應(yīng)條件優(yōu)化
            1.3.6 特異性和靈敏度實驗
            1.3.7 RT-RPA用于實際樣品的快速檢測
    2 結(jié)果和討論
        2.1 引物與探針的篩查
        2.2 反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.3 RT-RPA的特異性和靈敏度
        2.4 使用RT-RPA用于實際樣品快速檢測
    3 討論
    4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    英文縮略詞表
    碩士期間發(fā)表論文及科研情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]熒光信號放大檢測技術(shù)在生物大分子檢測中的研究和應(yīng)用[D]. 郭秋平.湖南大學(xué) 2011

碩士論文
[1]基于LFD-RPA的核酸可視化檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用[D]. 孫魁.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2017
[2]食品中轉(zhuǎn)基因成分的定量檢測研究[D]. 吳永彬.南方醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3732580