作者擬研究rfaE基因在副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）脂寡糖（LOS）刺激豬肺泡巨噬細胞（PAMs）信號通路分子的轉錄表達和MAPKs/NF-κB信號通路中的作用。提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株（ΔrfaE）和互補株（cΔrfaE）的LOS,分別用5和10μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS和cΔrfaE-LOS刺激PAMs,分別在不同時間點收集細胞,提取RNA和蛋白質。將提取的RNA反轉錄成cDNA,運用RT-PCR檢測TLR4、MD2、NF-κB、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA轉錄水平。測定提取蛋白質的濃度,利用Western blot方法檢測NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表達量。結果表明用5和10μg HPS-LOS刺激細胞6、12和24h后,TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA轉錄水平均顯著高于ΔrfaE-LOS刺激細胞后的以上轉錄因子的mRNA水平（P＜0.05）,但NF-κB的mRN... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌種、細胞
    1.2 主要試劑
    1.3 LOS的提取及濃度的測定
    1.4 豬肺泡巨噬細胞的培養(yǎng)及誘導
    1.5 總RNA的提取與反轉錄
    1.6 Real-Time PCR
    1.7 Western blot
    1.8 數據分析
2 結果
    2.1 RT-PCR檢測LOS對PAMs信號通路分子的mRNA轉錄水平的影響
    2.2 Western blot檢測LOS對NF-κB和MAPK信號通路的影響
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]rfaE基因在副豬嗜血桿菌LOS刺激豬肺泡巨噬細胞炎性因子mRNA轉錄中的作用[J]. 曾澤,岳華,馮曉輝,何歡,張斌.  畜牧獸醫(yī)學報. 2015(07)



本文編號：3720479