發(fā)布時(shí)間：2022-12-09 05:14

　　紅豆杉（Taxus sp.）能夠產(chǎn)生天然抗癌藥物紫杉醇（taxol）,但含量極低,開(kāi)發(fā)與利用之間存在嚴(yán)重矛盾。乙烯響應(yīng)因子（APETALA2/ethylene-responsive factor, AP2/ERF）對(duì)紅豆杉中紫杉醇的生物合成起到重要調(diào)控作用。研究組前期獲得了1個(gè)紅豆杉ERF轉(zhuǎn)錄因子基因（命名為TcERF）,為了更好地研究該基因的功能,本研究以曼地亞紅豆杉（Taxus×media）愈傷組織為實(shí)驗(yàn)材料,采用正交實(shí)驗(yàn)L9（34）方法,根據(jù)TcERF基因序列設(shè)計(jì)、組合出3對(duì)引物,從qRT-PCR反應(yīng)體系、cDNA模板用量和引物用量等方面進(jìn)行優(yōu)化,分別篩選出該基因在5μL小反應(yīng)體系及10、20μL常用體系下的最佳組合。結(jié)果表明,在本研究?jī)?yōu)化后的5μL體系下,TcERF和看家基因:3,5-表異構(gòu)酶-4-還原酶（3,5-epimerase-4-reductase, TBC41）基因的擴(kuò)增效率分別為90%和94%;在優(yōu)化后的10μL下,TcERF和TBC41的擴(kuò)增效率分別為94%和95%;在優(yōu)化后的20μL下,TcERF和TBC41的擴(kuò)增效率分別為102%和93%,以上各擴(kuò)增體系回歸系... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 總RNA提取和cDNA合成
    1.3 引物設(shè)計(jì)以及篩選
    1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及方案
    1.5 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
    1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    1.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 引物篩選
    2.2 引物TBC41和Tc F1R2的q RT-PCR正交實(shí)驗(yàn)
    2.3 TcERF基因qRT-PCR體系優(yōu)化
    2.4 最佳qRT-PCR體系驗(yàn)證
3 討論
4 結(jié)論



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