目的:MEX3A基因是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)因子,其與膀胱癌的關(guān)系尚未明確。本研究的目的在于通過慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù),探討抑制MEX3A基因表達對膀胱癌細胞增殖和凋亡功能的影響。研究方法:1.培養(yǎng)5637和T24兩種膀胱癌細胞株,實時定量PCR檢測MEX3A基因在兩種細胞株中的表達量,選取表達量高者進行后續(xù)實驗。2.參照基本設(shè)計原則,設(shè)計、選擇合適的RNA干擾序列。3.合成含干擾序列的雙鏈DNA,隨后連接酶作用后的慢病毒載體,再將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌細胞,經(jīng)聚合酶鏈式反應(yīng)鑒并測序驗證后,進行質(zhì)粒抽提應(yīng)用。4.鑒定及測序合格后與包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細胞產(chǎn)生慢病毒顆粒;病毒滴度測定后轉(zhuǎn)染經(jīng)步驟一選擇的細胞株（5637和T24二選一）,實驗組轉(zhuǎn)染MEX3A-shRNA慢病毒,對照組轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒,經(jīng)抗生素篩選建立穩(wěn)定表達siRNA的細胞株。5.收集實驗組和對照組細胞并提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)實時定量PCR檢測MEX3A基因敲減效率。6.慢病毒轉(zhuǎn)染三天后,將實驗組和對照組細胞分別接種于96孔板連續(xù)培養(yǎng)5天,每天使用全視野細胞掃描分析儀進行細胞計數(shù)并拍照。7.慢病毒轉(zhuǎn)染五天后,分別收... 

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
    2.2 MEX3A-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建
    2.3 慢病毒載體的包裝及滴度測定
    2.4 MEX3A基因在5637細胞株和T24細胞株的表達
    2.5 慢病毒感染及篩選穩(wěn)定表達MEX3A-shRNA的細胞株
    2.6 Real-TimePCR檢測MEX3A基因敲減效率
    2.7 細胞增殖檢測
    2.8 細胞凋亡檢測
    2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
3 結(jié)果
    3.1 MEX3A-shRNA慢病毒載體的鑒定及測序
    3.2 慢病毒載體的包裝及滴度測定
    3.3 MEX3A基因在膀胱癌細胞的表達
    3.4 慢病毒轉(zhuǎn)染5637細胞株及MEX3A基因的敲減效率
    3.5 細胞增殖檢測結(jié)果
    3.6 細胞凋亡檢測結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]腺性膀胱炎及膀胱癌中l(wèi)ivin和caspase-9的表達[J]. 丁德鑫,陳輝,王志,楊巍,喬忠杰.  現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2016(06)
[2]MTA-1及PCNA在腺性膀胱炎中的表達及臨床意義[J]. 王磊,王煒,王照,尹海軍,徐學軍,張傳光,張愛民,高景宇.  中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志. 2014(19)
[3]慢病毒載體及其介導(dǎo)的RNA干擾在基因治療中的應(yīng)用研究[J]. 趙鐵軍,倪偉海,鄭有芳,郭一孚,蔣歡樂,徐怡.  浙江師范大學學報(自然科學版). 2014(02)
[4]中國膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢分析[J]. 韓蘇軍,張思維,陳萬青,李長嶺.  癌癥進展. 2013(01)
[5]MAPK/ERK1與STAT3在脂多糖誘導(dǎo)的腺性膀胱炎動物模型中的表達[J]. 黃瑛,柳達,姜羅,溫昱,石玉秀.  解剖學報. 2012 (06)
[6]端粒、端粒酶及hTERT/hTERC基因的研究進展[J]. 徐慶華,朱寶生.  分子診斷與治療雜志. 2012(04)
[7]慢病毒載體在RNA干擾中的應(yīng)用進展[J]. 梁艷,李濤,周克元.  國際檢驗醫(yī)學雜志. 2010(11)
[8]腺性膀胱炎的腸上皮化生及其分子機制[J]. 黃瑛,柳達,郭寶生,姜羅,胡婷.  山東醫(yī)藥. 2010(23)
[9]端粒酶催化亞基在腺性膀胱炎中表達意義的研究[J]. 蔣利君,韋曉謀,沈思,謝廣靜.  檢驗醫(yī)學與臨床. 2009(02)
[10]SD大鼠腺性膀胱炎動物模型的建立[J]. 易憬,熊飛,蘇良平,李庭庭,陳登,章慧平,楊兵,張盛龍,張寶珍,劉長.  臨床外科雜志. 2008(08)

博士論文
[1]膀胱移行細胞癌Wnt信號通路抑制因子1基因啟動子甲基化狀態(tài)的基礎(chǔ)與臨床研究[D]. 傅斌.華中科技大學 2007
[2]STAT3信號通路在膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用[D]. 姚林方.華中科技大學 2006



本文編號：3708639