發(fā)布時(shí)間：2022-12-04 16:52

　　目的:MEX3A基因是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)因子,其與膀胱癌的關(guān)系尚未明確。本研究的目的在于通過慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù),探討抑制MEX3A基因表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖和凋亡功能的影響。研究方法:1.培養(yǎng)5637和T24兩種膀胱癌細(xì)胞株,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)MEX3A基因在兩種細(xì)胞株中的表達(dá)量,選取表達(dá)量高者進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.參照基本設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)、選擇合適的RNA干擾序列。3.合成含干擾序列的雙鏈DNA,隨后連接酶作用后的慢病毒載體,再將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞,經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒并測(cè)序驗(yàn)證后,進(jìn)行質(zhì)粒抽提應(yīng)用。4.鑒定及測(cè)序合格后與包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞產(chǎn)生慢病毒顆粒;病毒滴度測(cè)定后轉(zhuǎn)染經(jīng)步驟一選擇的細(xì)胞株（5637和T24二選一）,實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染MEX3A-shRNA慢病毒,對(duì)照組轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照慢病毒,經(jīng)抗生素篩選建立穩(wěn)定表達(dá)siRNA的細(xì)胞株。5.收集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞并提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)MEX3A基因敲減效率。6.慢病毒轉(zhuǎn)染三天后,將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞分別接種于96孔板連續(xù)培養(yǎng)5天,每天使用全視野細(xì)胞掃描分析儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并拍照。7.慢病毒轉(zhuǎn)染五天后,分別收... 

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
    2.2 MEX3A-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建
    2.3 慢病毒載體的包裝及滴度測(cè)定
    2.4 MEX3A基因在5637細(xì)胞株和T24細(xì)胞株的表達(dá)
    2.5 慢病毒感染及篩選穩(wěn)定表達(dá)MEX3A-shRNA的細(xì)胞株
    2.6 Real-TimePCR檢測(cè)MEX3A基因敲減效率
    2.7 細(xì)胞增殖檢測(cè)
    2.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
    2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
3 結(jié)果
    3.1 MEX3A-shRNA慢病毒載體的鑒定及測(cè)序
    3.2 慢病毒載體的包裝及滴度測(cè)定
    3.3 MEX3A基因在膀胱癌細(xì)胞的表達(dá)
    3.4 慢病毒轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞株及MEX3A基因的敲減效率
    3.5 細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果
    3.6 細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腺性膀胱炎及膀胱癌中l(wèi)ivin和caspase-9的表達(dá)[J]. 丁德鑫,陳輝,王志,楊巍,喬忠杰.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(06)
[2]MTA-1及PCNA在腺性膀胱炎中的表達(dá)及臨床意義[J]. 王磊,王煒,王照,尹海軍,徐學(xué)軍,張傳光,張愛民,高景宇.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2014(19)
[3]慢病毒載體及其介導(dǎo)的RNA干擾在基因治療中的應(yīng)用研究[J]. 趙鐵軍,倪偉海,鄭有芳,郭一孚,蔣歡樂,徐怡.  浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(02)
[4]中國膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢(shì)分析[J]. 韓蘇軍,張思維,陳萬青,李長(zhǎng)嶺.  癌癥進(jìn)展. 2013(01)
[5]MAPK/ERK1與STAT3在脂多糖誘導(dǎo)的腺性膀胱炎動(dòng)物模型中的表達(dá)[J]. 黃瑛,柳達(dá),姜羅,溫昱,石玉秀.  解剖學(xué)報(bào). 2012 (06)
[6]端粒、端粒酶及hTERT/hTERC基因的研究進(jìn)展[J]. 徐慶華,朱寶生.  分子診斷與治療雜志. 2012(04)
[7]慢病毒載體在RNA干擾中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 梁艷,李濤,周克元.  國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2010(11)
[8]腺性膀胱炎的腸上皮化生及其分子機(jī)制[J]. 黃瑛,柳達(dá),郭寶生,姜羅,胡婷.  山東醫(yī)藥. 2010(23)
[9]端粒酶催化亞基在腺性膀胱炎中表達(dá)意義的研究[J]. 蔣利君,韋曉謀,沈思,謝廣靜.  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床. 2009(02)
[10]SD大鼠腺性膀胱炎動(dòng)物模型的建立[J]. 易憬,熊飛,蘇良平,李庭庭,陳登,章慧平,楊兵,張盛龍,張寶珍,劉長(zhǎng).  臨床外科雜志. 2008(08)

博士論文
[1]膀胱移行細(xì)胞癌Wnt信號(hào)通路抑制因子1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的基礎(chǔ)與臨床研究[D]. 傅斌.華中科技大學(xué) 2007
[2]STAT3信號(hào)通路在膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用[D]. 姚林方.華中科技大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3708639