發(fā)布時間：2022-12-03 22:12

　　乳腺癌是一類復(fù)雜的異質(zhì)類疾病,乳腺癌的分型方法很多,但都不夠精確且對治療沒有很好的指導(dǎo)意義,尤其是惡性程度高、難治愈的三陰型乳腺癌,尚未尋找到對其準(zhǔn)確有效的臨床診斷方法和治療靶點。尋找合理準(zhǔn)確的分型標(biāo)志基因,對乳腺癌及三陰型乳腺癌的分型鑒別、診斷和治療起著至關(guān)重要的作用。在本研究中,我們探索了分型標(biāo)志基因FOXA1、SOD2和IL6在三陰性乳腺癌中的分型效果及相關(guān)機制。采用生物信息學(xué)分析和分子實驗驗證相結(jié)合的方法:通過檢測體外三陰性乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平、分析數(shù)據(jù)庫中乳腺癌細(xì)胞系和臨床樣本的基因表達水平,我們系統(tǒng)地分析研究了FOXA1、SOD2和IL6作為分型標(biāo)志基因,對三陰型乳腺癌和非三陰型乳腺癌的區(qū)分效果;通過預(yù)測公共數(shù)據(jù)庫轉(zhuǎn)錄結(jié)合情況、進行染色質(zhì)免疫共沉淀和雙熒光素報告基因?qū)嶒灥?分析和驗證FOXA1與SOD2和IL6之間的相關(guān)性。我們還通過大量的體外細(xì)胞學(xué)實驗,對FOXA1、SOD2和IL6的功能進行相關(guān)研究。結(jié)果顯示:FOXA1低表達可導(dǎo)致惡性腫瘤增殖能力增強,且FOXA1通過轉(zhuǎn)錄抑制SOD2和IL6的表達,從而影響三陰型乳腺癌細(xì)胞的凋亡,遷移及干細(xì)胞比例,這提示我們:F... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 乳腺癌概述
    1.2 乳腺癌分子分型
        1.2.1 乳腺癌組織分子分型
        1.2.2 乳腺癌細(xì)胞系分子分型
        1.2.3 乳腺癌細(xì)胞系和組織分子分型聯(lián)系
    1.3 三陰型乳腺癌研究現(xiàn)狀
    1.4 乳腺癌分型標(biāo)志基因簡介
    1.5 立題依據(jù)與意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 抗體
        2.1.3 試劑盒和耗材
        2.1.4 試劑及試劑配制
        2.1.5 儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 瞬時轉(zhuǎn)染siRNA
        2.2.3 瞬時轉(zhuǎn)染CRISPR基因編輯質(zhì)粒
        2.2.4 qRT-PCR實驗檢測
        2.2.5 Western-blot實驗檢測
        2.2.6 細(xì)胞增殖實驗
        2.2.7 細(xì)胞凋亡實驗
        2.2.8 干細(xì)胞比例流式檢測實驗
        2.2.9 細(xì)胞遷移實驗
        2.2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀實驗
        2.2.11 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        2.3.1 公共數(shù)據(jù)庫基因表達分析
        2.3.2 KM plotter預(yù)后分析
        2.3.3 實驗結(jié)果統(tǒng)計分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 分型基因在乳腺癌細(xì)胞系層面的分型研究
        3.1.1 利用E-MTAB-181數(shù)據(jù)庫分析分型基因分型效果
        3.1.2 利用qRT-PCR檢測分型基因在不同亞型乳腺癌細(xì)胞系的mRNA表達差異
        3.1.3 利用Western-blot檢測分型基因在不同亞型乳腺癌細(xì)胞系的蛋白表達差異
        3.1.4 小結(jié)
    3.2 分型基因在乳腺癌組織層面的分型研究
        3.2.1 利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析分型基因?qū)θ橄侔┙M織的分型效果
        3.2.2 利用METABRIC數(shù)據(jù)庫分析分型基因?qū)θ橄侔┙M織的分型效果
        3.2.3 小結(jié)
    3.3 FOXA1基因的功能研究
        3.3.1 利用siRNA降低乳腺癌細(xì)胞中的FOXA1表達
        3.3.2 FOXA1低表達對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
        3.3.3 FOXA1低表達對乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.4 FOXA1低表達對乳腺癌細(xì)胞干細(xì)胞比例的影響
        3.3.5 FOXA1低表達對乳腺癌細(xì)胞遷移的影響
        3.3.6 FOXA1對于乳腺癌患者的預(yù)后分析
        3.3.7 小結(jié)
    3.4 SOD2基因的功能研究
        3.4.1 利用siRNA降低乳腺癌細(xì)胞中的SOD2表達
        3.4.2 SOD2低表達對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
        3.4.3 SOD2低表達對乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.4.4 SOD2低表達對乳腺癌細(xì)胞遷移的影響
        3.4.5 SOD2對于乳腺癌患者的預(yù)后分析
        3.4.6 小結(jié)
    3.5 IL6基因的功能研究
        3.5.1 利用siRNA降低乳腺癌細(xì)胞中的IL6表達
        3.5.2 IL6低表達對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
        3.5.3 IL6低表達對乳腺癌細(xì)胞干細(xì)胞比例的影響
        3.5.4 IL6低表達對乳腺癌細(xì)胞遷移的影響
        3.5.5 IL6對于乳腺癌患者的預(yù)后分析
        3.5.6 小結(jié)
    3.6 分型基因之間相關(guān)性研究
        3.6.1 利用數(shù)據(jù)庫分析分型基因FOXA1,SOD2和IL6相關(guān)性
        3.6.2 FOXA1表達量改變對SOD2和IL6表達的影響
        3.6.3 FOXA1蛋白與SOD2和IL6啟動子區(qū)域物理結(jié)合研究
        3.6.4 FOXA1對于SOD2和IL6的基因表達調(diào)控研究
        3.6.5 小結(jié)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]IL-6、CCL-18表達情況對乳腺癌病理診斷的相關(guān)性分析及其臨床意義[J]. 張曄,石海英,趙德芳,王震霞,張雅峰.  腫瘤藥學(xué). 2018(01)
[2]激素受體陽性晚期乳腺癌的內(nèi)分泌治療進展[J]. 徐綺膩,王鴻彪.  中國腫瘤. 2017(10)
[3]腫瘤標(biāo)志物陽性率與乳腺癌病理分型的相關(guān)性分析[J]. 劉中,李希寧,羅志琴,張忠民.  檢驗醫(yī)學(xué). 2017(05)
[4]乳腺癌分子分型對治療的影響[J]. 江澤飛,許鳳銳.  中華普外科手術(shù)學(xué)雜志(電子版). 2015(06)
[5]雌激素受體陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥機制的研究進展[J]. 柳慧星,王燕忠,于海濤,張鈞,謝鑫友.  腫瘤. 2015(09)
[6]三陰性乳腺癌分子特征與潛在治療靶點[J]. 尉承澤,郝曉鵬.  中國實用外科雜志. 2015(07)
[7]乳腺癌分子分型與治療策略[J]. 趙毅,鄧鑫.  中國實用外科雜志. 2015(07)
[8]乳腺癌患者血清IL-6、IL-1β、TNF-ɑ的變化及其臨床意義[J]. 凌存保,吳雋松.  標(biāo)記免疫分析與臨床. 2014(05)
[9]靶向治療藥物的分子靶點蛋白在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義[J]. 王齊敏,于香莉,呂麗,唐穎,馮曉海,王莉芬.  腫瘤學(xué)雜志. 2014(09)
[10]三陰性乳腺癌化療進展[J]. 倪晨,李婷,吳振華,胡夕春.  中國癌癥雜志. 2014(04)



本文編號：3707078