目的:肺癌是世界范圍導(dǎo)致最多人數(shù)死亡的癌癥,相關(guān)治療和診斷近年雖有所改善,但五年生存率依然不高。啟動(dòng)子CpG島甲基化是基因表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制之一,腫瘤相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化可影響其表達(dá),一方面影響腫瘤生物學(xué)行為,另一方面也可能成為腫瘤的相關(guān)診斷標(biāo)志。本課題通過數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)對(duì)肺癌相關(guān)候選基因進(jìn)行篩選,然后對(duì)這些基因的啟動(dòng)子DNA甲基化情況進(jìn)行分析和驗(yàn)證,探討與肺癌相關(guān)的基因啟動(dòng)子甲基化情況,為探討肺癌發(fā)病機(jī)制和尋找潛在肺癌診斷生物標(biāo)志物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用特異性定量甲基化PCR（qMSP）對(duì)非小細(xì)胞肺癌的癌組織、癌旁組織和遠(yuǎn)端癌旁組織樣本進(jìn)行肺癌相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化水平的測試。并且結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)陽性基因啟動(dòng)子甲基化的分析。以甲基化參考百分比（PMR）作為甲基化水平衡量標(biāo)準(zhǔn)。采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)對(duì)三組樣本進(jìn)行各基因啟動(dòng)子甲基化水平檢測。最后對(duì)篩查的三個(gè)陽性基因進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞功能驗(yàn)證,通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測啟動(dòng)子活性,采用5’-aza-deoxycytidine處理肺癌細(xì)胞系,檢測啟動(dòng)子去甲基化對(duì)陽性基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1、對(duì)肺癌相關(guān)基因進(jìn)行甲基化引物檢測后,確定了22個(gè)... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 樣本收集及細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        1.3 主要試劑
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 樣本收集與處理
        2.2 樣本甲基化處理、檢測和統(tǒng)計(jì)分析
        2.3 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代和凍存
        2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.5 熒光素酶報(bào)告基因檢測
        2.6 5 ’-aza-deoxycytidine去甲基化處理
        2.7 熒光定量PCR
        2.8 生物信息分析
        2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 多個(gè)肺癌候選基因的篩選與基因甲基化檢測
    3.2 TNFRSF10C基因組間甲基化水平分析和TCGA數(shù)據(jù)庫分析
    3.3 PRKCDBP基因組間甲基化水平分析和TCGA數(shù)據(jù)庫分析
    3.4 EPAS1 基因組間甲基化水平分析和TCGA數(shù)據(jù)庫分析
    3.5 TNFRSF10C、PRKCDBP和 EPAS1 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)
討論
    1.TNFRSF10C甲基化與肺癌
    2.PRKCDBP甲基化與肺癌
    3.EPAS1 甲基化與肺癌
參考文獻(xiàn)
DNA甲基化與肺癌臨床診斷的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3698702