發(fā)布時間：2022-10-19 13:47

　　目的:研究食管鱗癌Eca109細胞中,Survivin是否參與TNF-α誘導PD-L1表達增高,初步確定與PD-L1表達相關的信號通路;明確以上信號通路蛋白細胞外泌體中含量的變化。方法:1)選用腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導食管鱗癌細胞Eca109,使PD-L1表達增高;2)通過ERK、MEK、JNK、PI3K/AKT、STAT3、PKA、PKC、Hedgehog、CaMK2信號通路抑制劑SCH772984、PD98059、SP600125、LY294002、AG490、H89、Staurosporine、Vismodegib、KN62干預Eca109細胞1.5、3、6、12、24小時,篩選TNF-α誘導PD-L1高表達的主要細胞內(nèi)信號傳導通路;3)使用Flag-Survivin過表達載體、Survivin的抑制劑YM155及篩選的主要信號傳導通路抑制劑對Eca109細胞進行干預3、12、24小時;4)收集不同處理組中的細胞培養(yǎng)基上清,采用超高速離心法提取外泌體。本實驗中選用免疫印跡Western blot蛋白電泳方法檢測抑制劑干預后相關信號通路的相關基因ERK、MEK、JNK、PI... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞對照表
摘要
Abstract
前言
研究內(nèi)容與方法
    1 實驗材料及設備
        1.1 實驗材料
        1.2 試劑設備
    2 實驗方法
        2.1 細胞實驗
        2.2 感受態(tài)細菌轉(zhuǎn)化
        2.3 質(zhì)粒抽提
        2.4 脂質(zhì)體電轉(zhuǎn)染
        2.5 PD-L1 高表達模型建立
        2.6 細胞凋亡
        2.7 免疫印跡(Western blot)
        2.8 外泌體的提取
    3 質(zhì)量控制
        3.1 樣本控制
        3.2 實驗技術
        3.3 儀器質(zhì)控
    4 統(tǒng)計方法
    5 技術路線
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3693475