La蛋白作為一種RNA結(jié)合蛋白廣泛存在于各種真核生物,其作用主要是結(jié)合于新合成RNA的3’端并參與加工與代謝。La蛋白可以結(jié)合的RNA包括RNA聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄的所有新合成轉(zhuǎn)錄子和一些其他RNA聚合酶合成的小RNA。擬南芥中真正的La基因已經(jīng)被證實是AtLa1,在胚胎生長發(fā)育過程中起重要作用。其表達水平敲低后導致莖尖分生組織無法維持,而AtLa1的缺失導致atla1突變體胚胎發(fā)育終止。然而糧食作物水稻中的La基因尚未有研究報道。水稻中存在兩個La蛋白的同源基因,即LOCOs02g39700（Os39）和LOC_Os04g42010（Os42）。本研究通過qRT-PCR及啟動子驅(qū)動的GUS組織染色分析發(fā)現(xiàn)Os39和Os42在水稻組織中基本成組成型表達,與Genevestigator數(shù)據(jù)庫預(yù)測的數(shù)據(jù)相符;亞細胞定位結(jié)果顯示這兩個基因都定位于細胞核中,并且通過對開放閱讀框的截短實驗發(fā)現(xiàn)蛋白核定位信號存在于碳末端30個氨基酸中;Os42的過表達植株與野生型相比沒有明顯變化,而其CRISPR/Cas9敲除植株表現(xiàn)出植株矮化、葉片向遠軸端卷曲等表型,與AtLa1的轉(zhuǎn)基因抑制株系的植... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 La蛋白概述
        1.1.1 La蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 La蛋白的功能
        1.1.3 擬南芥La蛋白研究
    1.2 水稻的葉卷曲
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 水稻實驗操作
        2.3.2 煙草葉片的瞬時轉(zhuǎn)化
        2.3.3 分子生物學實驗操作
        2.3.4 蛋白實驗操作
        2.3.5 GUS染色
        2.3.6 生物信息學分析
        2.3.7 本實驗相關(guān)引物及質(zhì)粒示意圖
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 水稻中的La同源蛋白
    3.2 Os39和Os42表達模式分析
        3.2.1 基因芯片數(shù)據(jù)預(yù)測Os39和Os42基因表達模式
        3.2.2 qRT-PCR分析Os39和Os42基因表達模式
        3.2.3 Os42啟動子活性檢測
    3.3 Os39和Os42蛋白亞細胞定位分析
        3.3.1 亞細胞定位表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 開放閱讀框截短實驗
        3.3.3 Os39和Os42蛋白亞細胞定位
    3.4 水稻La基因的功能探究
        3.4.1 Os39和Os42基因超量表達載體的構(gòu)建
        3.4.2 Os39和Os42基因超量表達轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定
        3.4.3 qRT-PCR檢測超量表達轉(zhuǎn)基因水稻中Os39和Os42基因的表達水平
        3.4.4 Western Blot檢測Os39和Os42蛋白的表達
        3.4.5 CRISPR/Cas9-Os39轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
        3.4.6 CRISPR/Cas9-Os42轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
        3.4.7 Os42突變體植物中水稻葉卷相關(guān)基因表達水平檢測
        3.4.8 Os39和Os42對擬南芥atla1突變體的功能恢復(fù)實驗檢測
第四章 討論
參考文獻
致謝



本文編號：3684815