La蛋白作為一種RNA結(jié)合蛋白廣泛存在于各種真核生物,其作用主要是結(jié)合于新合成RNA的3’端并參與加工與代謝。La蛋白可以結(jié)合的RNA包括RNA聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄的所有新合成轉(zhuǎn)錄子和一些其他RNA聚合酶合成的小RNA。擬南芥中真正的La基因已經(jīng)被證實(shí)是AtLa1,在胚胎生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起重要作用。其表達(dá)水平敲低后導(dǎo)致莖尖分生組織無(wú)法維持,而AtLa1的缺失導(dǎo)致atla1突變體胚胎發(fā)育終止。然而糧食作物水稻中的La基因尚未有研究報(bào)道。水稻中存在兩個(gè)La蛋白的同源基因,即LOCOs02g39700（Os39）和LOC_Os04g42010（Os42）。本研究通過(guò)qRT-PCR及啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GUS組織染色分析發(fā)現(xiàn)Os39和Os42在水稻組織中基本成組成型表達(dá),與Genevestigator數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)的數(shù)據(jù)相符;亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示這兩個(gè)基因都定位于細(xì)胞核中,并且通過(guò)對(duì)開(kāi)放閱讀框的截短實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蛋白核定位信號(hào)存在于碳末端30個(gè)氨基酸中;Os42的過(guò)表達(dá)植株與野生型相比沒(méi)有明顯變化,而其CRISPR/Cas9敲除植株表現(xiàn)出植株矮化、葉片向遠(yuǎn)軸端卷曲等表型,與AtLa1的轉(zhuǎn)基因抑制株系的植... 

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 La蛋白概述
        1.1.1 La蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 La蛋白的功能
        1.1.3 擬南芥La蛋白研究
    1.2 水稻的葉卷曲
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 水稻實(shí)驗(yàn)操作
        2.3.2 煙草葉片的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化
        2.3.3 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作
        2.3.4 蛋白實(shí)驗(yàn)操作
        2.3.5 GUS染色
        2.3.6 生物信息學(xué)分析
        2.3.7 本實(shí)驗(yàn)相關(guān)引物及質(zhì)粒示意圖
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 水稻中的La同源蛋白
    3.2 Os39和Os42表達(dá)模式分析
        3.2.1 基因芯片數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)Os39和Os42基因表達(dá)模式
        3.2.2 qRT-PCR分析Os39和Os42基因表達(dá)模式
        3.2.3 Os42啟動(dòng)子活性檢測(cè)
    3.3 Os39和Os42蛋白亞細(xì)胞定位分析
        3.3.1 亞細(xì)胞定位表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 開(kāi)放閱讀框截短實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 Os39和Os42蛋白亞細(xì)胞定位
    3.4 水稻La基因的功能探究
        3.4.1 Os39和Os42基因超量表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.2 Os39和Os42基因超量表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定
        3.4.3 qRT-PCR檢測(cè)超量表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻中Os39和Os42基因的表達(dá)水平
        3.4.4 Western Blot檢測(cè)Os39和Os42蛋白的表達(dá)
        3.4.5 CRISPR/Cas9-Os39轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
        3.4.6 CRISPR/Cas9-Os42轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
        3.4.7 Os42突變體植物中水稻葉卷相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)
        3.4.8 Os39和Os42對(duì)擬南芥atla1突變體的功能恢復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
第四章 討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3684815