赤擬谷盜（Tribolium castaneum）是一種具有重要經(jīng)濟(jì)意義的世界性儲藏物害蟲,最重要的防治方法是磷化氫熏蒸,由于長期大量而不合理的使用,導(dǎo)致赤擬谷盜對磷化氫的抗性逐漸增加,明確赤擬谷盜對磷化氫的抗性機(jī)理對合理的防治策略的提出以及替代有效熏蒸劑的開發(fā)具有重要的作用。細(xì)胞色素P450酶是昆蟲體內(nèi)三大解毒代謝酶系之一,是昆蟲體內(nèi)唯一介導(dǎo)多種殺蟲劑抗性的酶系。為探討細(xì)胞色素P450在赤擬谷盜對磷化氫產(chǎn)生抗性的作用,本論文以不同抗性水平的赤擬谷盜為研究對象,在準(zhǔn)確測定其對磷化氫的抗性系數(shù)的基礎(chǔ)上;通過生理生化及分子生物學(xué)方法研究赤擬谷盜細(xì)胞色素P450與磷化氫抗藥性的關(guān)系,得出以下結(jié)果:（1）采用FAO推薦的磷化氫測定方法對采自不同地區(qū)的2個赤擬谷盜品系進(jìn)行抗性測定,結(jié)果表明,深圳（SZ）品系屬于高抗性品系,其LC₅₀為7763.9μg/L,抗性系數(shù)達(dá)862.7;云南（YN）品系為敏感品系,抗性系數(shù)為3.0。酶活力測定結(jié)果表明,高抗品系（SZ）的P450比活力顯著高于敏感品系（P＜0.05）。利用細(xì)胞色素P450酶的專一性抑制劑增效醚（PBO）處理后,2個品系... 

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 赤擬谷盜的危害及研究現(xiàn)狀
    1.2 儲糧害蟲對磷化氫抗藥性的現(xiàn)狀概述
    1.3 赤擬谷盜磷化氫抗性機(jī)制的概述
    1.4 細(xì)胞色素P450 酶系
        1.4.1 細(xì)胞色素P450 酶系的構(gòu)成
        1.4.2 細(xì)胞色素P450 酶的特征與多樣性
        1.4.3 細(xì)胞色素P450 介導(dǎo)昆蟲的抗藥性
    1.5 熒光定量PCR
    1.6 RNA干擾技術(shù)研究進(jìn)展
    1.7 本研究立題依據(jù)及研究內(nèi)容
        1.7.1 立題依據(jù)
        1.7.2 主要內(nèi)容
第二章 赤擬谷盜的磷化氫抗性測定及細(xì)胞色素P450 酶活測定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 試驗(yàn)方法
        2.1.5 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 赤擬谷盜對磷化氫抗性水平測定
        2.2.2 細(xì)胞色素P450 比活力的測定及PBO對其抑制作用
        2.2.3 PBO對磷化氫的增效作用
    2.3 討論
第三章 CYP346 基因家族5 條基因的序列分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 赤擬谷盜CYP346 家族5 條基因的氨基酸序列分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 赤擬谷盜CYP346 基因家族的氨基酸序列分析
        3.2.2 赤擬谷盜CYP346 家族5 條基因同源性分析
    3.3 討論
第四章 赤擬谷盜CYP346 家族5 條基因的表達(dá)模式及其與磷化氫抗性關(guān)系研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試?yán)ハx
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 試驗(yàn)方法
        4.1.5 赤擬谷盜總RNA提取
        4.1.6 RNA濃度及質(zhì)量的檢測
        4.1.7 第一鏈cDNA的合成
        4.1.8 定量PCR引物的設(shè)計(jì)與內(nèi)參基因的選擇
        4.1.9 基因引物特異性驗(yàn)證、PCR產(chǎn)物熔解曲線與擴(kuò)增效率的分析
        4.1.10 熒光定量PCR反應(yīng)
        4.1.11 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 RNA提取結(jié)果
        4.2.2 引物特異性驗(yàn)證與擴(kuò)增效率分析
        4.2.3 赤擬谷盜CYP346 家族5 條基因在不同品系的表達(dá)分析
        4.2.4 CYP346 基因家族在磷化氫脅迫下的表達(dá)分析
    4.3 討論
第五章 基于RNAi技術(shù)對赤擬谷盜CYP346 家族5 條基因的功能驗(yàn)證
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試?yán)ハx
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
        5.1.4 研究方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 CYP346 基因家族的沉默效率檢測
        5.2.2 干擾CYP346 基因家族后赤擬谷盜對磷化氫的敏感性測定
    5.3 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
        6.1.1 明確赤擬谷盜的磷化氫抗性水平及P450 酶在抗性形成中的作用
        6.1.2 明確赤擬谷盜CYP346 基因家族基因氨基酸序列
        6.1.3 熒光定量PCR分析CYP346 家族5 條基因在不同抗性品系中以及經(jīng)磷化氫脅迫后的表達(dá)模式
        6.1.4 基于RNAi的赤擬谷盜CYP346 基因家族在磷化氫抗性中的作用
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用研究[J]. 楊弘華,宋燕燕,林曉波,張敏瑜,李妍,倪煥峰,劉洋.  山東化工. 2016(22)
[2]昆蟲RNA干擾中雙鏈RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)方式[J]. 劉吉升,朱文輝,廖文麗,卜曉玲,江婉儀.  昆蟲學(xué)報. 2016(06)
[3]國際儲藏物保護(hù)研究進(jìn)展——第十一屆國際儲藏物保護(hù)工作會議情況綜述[J]. 李月,李克強(qiáng),郭道林,付鵬程,李浩杰,許勝偉,石恒.  糧食儲藏. 2015(01)
[4]甜菜夜蛾UAP的克隆、時空表達(dá)及RNAi研究[J]. 陳潔,陳宏鑫,姚瓊,張文慶.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[5]磷化氫誘導(dǎo)下赤擬谷盜實(shí)時定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 劉金泊,歐靜,姚富姣,何磊,奚耕思,魏朝明.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(02)
[6]綠盲蝽P450基因的克隆及增效醚對P450酶活性的抑制作用[J]. 許新新,譚瑤,高希武.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2012(02)
[7]鄂中地區(qū)四種儲糧害蟲對磷化氫抗性發(fā)展及對策研究[J]. 周天智,劉士強(qiáng),馬文斌,高興明,付文忠,喻梅.  糧食儲藏. 2011(04)
[8]實(shí)時定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 劉彩云,劉洪祥,王鳳龍.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(05)
[9]高效液相色譜法測定家蠅細(xì)胞色素P450O-脫甲基活性[J]. 艾國民,王慶敏,鄒東云,高希武,李富根.  分析化學(xué). 2009(08)
[10]RNAi技術(shù)的研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 程弈星,劉東成.  科技創(chuàng)新導(dǎo)報. 2008(09)

博士論文
[1]朱砂葉螨抗甲氰菊酯P450基因鑒定及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D]. 石力.西南大學(xué) 2017
[2]赤擬谷盜RNAi及dsRNA脫靶效應(yīng)的研究[D]. 王錦達(dá).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]柑橘全爪螨細(xì)胞色素P450及其相關(guān)基因的鑒定和表達(dá)模式研究[D]. 丁天波.西南大學(xué) 2014
[4]植物次生物質(zhì)對棉鈴蟲細(xì)胞色素P450s的誘導(dǎo)及CYP6B6基因的克隆與表達(dá)[D]. 劉小寧.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]朱砂葉螨UGT201D3基因參與阿維菌素抗藥性的機(jī)制研究[D]. 王夢瑤.西南大學(xué) 2018
[2]赤擬谷盜細(xì)胞色素P450 CYP345D3 cDNA基因克隆與序列分析[D]. 楊帆.西南大學(xué) 2008



本文編號：3684082