桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis（Hendel）是一種危險(xiǎn)性果蔬害蟲,常見于熱帶及亞熱帶地區(qū),其食性廣,適應(yīng)能力強(qiáng),已被多個(gè)地區(qū)和國(guó)家當(dāng)作檢疫性害蟲而加以隔離,對(duì)國(guó)際貿(mào)易造成了諸多限制。目前,桔小實(shí)蠅的防控以化學(xué)藥劑為主,然而幼蟲一旦在果內(nèi)產(chǎn)卵危害,藥劑噴灑難以奏效,同時(shí)將導(dǎo)致嚴(yán)重的環(huán)境污染和食品安全問題。因此,發(fā)掘綠色、安全的新型藥劑作用靶標(biāo)勢(shì)在必行。保幼激素（Juvenile hormone,JH）在昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育、變態(tài)、生殖等生理過程中均發(fā)揮重要作用。保幼激素酸甲基轉(zhuǎn)移酶（Juvenile hormone acid O-methyl-transferase,JHAMT）是保幼激素合成過程中重要的調(diào)控酶。本研究以桔小實(shí)蠅基因組及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),克隆獲得了BdJHAMT和BdJHAMT-like的開放閱讀框序列,明確了BdJHAMT和BdJHAMT-like與其他昆蟲同源序列的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系;并利用qPCR解析了BdJHAMT和BdJHAMT-like的時(shí)空表達(dá)模式,基于免疫組化開展了BdJHAMT的組織定位;采用高效液相色譜技術(shù),明確了桔小實(shí)蠅各發(fā)育階段的JH Ⅲ滴度... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
文獻(xiàn)綜述
    1 桔小實(shí)蠅的危害及生活史
    2 昆蟲保幼激素(Juvenile hormone, JH)
        2.1 天然 JH 及 JH 類似物(JH mimics, JHM)
        2.2 保幼激素(JH)的生物合成途徑
    3 保幼激素(JH)合成通路關(guān)鍵基因
        3.1 保幼激素酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Juvenile hormone acid methyltransferase,JHAMT)
        3.2 法尼酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Faenesoic acid O-methyltransferase,FAMeT)
        3.3 CYP15家族
引言
第一章 桔小實(shí)蠅BdJHAMT基因的克隆及序列分析
    1 材料和方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 試驗(yàn)主要試劑和儀器
        1.3 樣品總RNA提取
        1.4 總RNA中基因組DNA去除
        1.5 第一鏈cDNA的合成
        1.6 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.7 PCR擴(kuò)增
        1.8 目的片段克隆與測(cè)序
        1.9 系統(tǒng)發(fā)育樹建立
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdJHAMT序列生物信息學(xué)分析
        2.2 BdJHAMT氨基酸序列結(jié)構(gòu)及其系統(tǒng)發(fā)育分析
    3 討論與小結(jié)
第二章 桔小實(shí)蠅BdJHAMT的時(shí)空表達(dá)模式與JH滴度譜解析
    1 材料和方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 試驗(yàn)主要試劑和儀器
        1.3 抗體制備
        1.4 試蟲樣品準(zhǔn)備
        1.5 樣品總RNA提取
        1.6 總RNA中基因組DNA去除
        1.7 第一鏈cDNA的合成
        1.8 特異性定量引物設(shè)計(jì)與合成
        1.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.10 HPLC檢測(cè)
        1.11 免疫組化分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdJHAMT和 BdJHAMT-like在桔小實(shí)蠅不同發(fā)育階段的表達(dá)模式
        2.2 BdJHAMT和 BdJHAMT-like在桔小實(shí)蠅不同組織的表達(dá)模式
        2.3 JHⅢ滴度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.4 桔小實(shí)蠅JHⅢ滴度檢測(cè)與滴度譜建立
        2.5 BdJHAMT在桔小實(shí)蠅中的組織定位
    3 討論與小結(jié)
第三章 BdJHAMT參與桔小實(shí)蠅生長(zhǎng)發(fā)育的功能探究
    1 材料和方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 試驗(yàn)主要試劑和儀器
        1.3 RNAi
        1.4 表型觀察
        1.5 烯蟲酯處理
        1.6 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 干擾BdJHAMT和 BdJHAMT-like對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲產(chǎn)卵量的影響
        2.2 干擾BdJHAMT對(duì)桔小實(shí)蠅幼蟲生長(zhǎng)進(jìn)度的影響
        2.3 烯蟲酯處理對(duì)RNAi后桔小實(shí)蠅幼蟲生長(zhǎng)進(jìn)度的影響
    3 討論與小結(jié)
第四章 主要結(jié)果及研究展望
    1 主要結(jié)果
        1.1 克隆獲得了桔小實(shí)蠅BdJHAMT的開放閱讀框序列
        1.2 解析了BdJHAMT的時(shí)空表達(dá)模式及其組織定位
        1.3 明確了桔小實(shí)蠅JHⅢ滴度譜
        1.4 探究了BdJHAMT在桔小實(shí)蠅中的生理表型變化
    2 研究展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]麥紅吸漿蟲保幼激素含量測(cè)定[J]. 李英梅,仵均祥,成衛(wèi)寧,李怡萍,侯娟娟.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2006(04)
[2]用HPLC測(cè)定松墨天牛體內(nèi)的保幼激素[J]. 錢明惠,范軍祥,秦長(zhǎng)生.  廣東林業(yè)科技. 2004(02)
[3]鞭角華扁葉蜂保幼激素滴度的動(dòng)態(tài)[J]. 王滿囷,李周直.  林業(yè)科學(xué). 2002(05)
[4]用HPLC測(cè)定稻褐飛虱體內(nèi)的保幼激素[J]. 楊亦樺,戴華國(guó),韓航如,王鳴華.  華東昆蟲學(xué)報(bào). 1997(02)
[5]用HPLC測(cè)定長(zhǎng)角血蜱中的保幼激素[J]. 云自厚,楊軼帆,姜在階,陳湘.  北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1992(02)
[6]蓖麻蠶蛹期血淋巴中保幼激素滴度的測(cè)定[J]. 王宗舜,鄭文惠,郭郛.  科學(xué)通報(bào). 1988(15)

碩士論文
[1]基于保幼激素合成酶的生態(tài)友好殺蟲劑靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)[D]. 殷玥.上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3682320