禽傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis,IB）是由禽傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起家禽的一種急性、高度傳染性疾病,給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。目前,疫苗免疫接種仍是IB有效的防治措施之一,但IBV容易發(fā)生變異,出現(xiàn)新的血清型和基因型。因此,疫苗對流行株的免疫保護效果存在差異。前期研究結(jié)果顯示,常用的兩種弱毒疫苗4/91和H120對當下流行基因型QX型毒株的保護效果有差異,但是其機理尚不清楚。本文擬用4/91和H120分別免疫雞群,檢測免疫后細胞免疫應答、體液免疫應答和局部氣管黏膜免疫應答的差異,然后用QX型毒株A/CK/MeiShan/17株（簡稱MS株）進行攻毒,統(tǒng)計發(fā)病率和死亡率、觀察組織病變、檢測細胞免疫相關基因的表達和攻毒毒株的病毒載量,以期揭示4/91和H120弱毒疫苗的差異保護的機理。本文分別構(gòu)建了細胞免疫相關的三個基因（PFP、GAMA、IFN-γ）、內(nèi)參基因（ACTB）和攻毒毒株檢測基因1a（MS1a）的標準曲線,試驗結(jié)果表明:建立的五個標準曲線擴增效率（E）分別為1.95、2.00、1.... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫對照表
第一部分 文獻綜述及選題意義
    1 雞傳染性支氣管炎概述
        1.1 病原學
        1.2 IBV的流行趨勢
        1.3 IBV疫苗的研究進展
        1.4 局部黏膜免疫和特異性免疫應答
        1.5 IB實驗室診斷技術
    2 研究的目的和意義
第二部分 試驗內(nèi)容
    試驗一 熒光定量標準曲線的建立
        1 試驗材料
            1.1 試驗樣品、菌株和毒株
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 常用試劑的配置
            1.4 熒光定量引物的設計
        2 試驗方法
            2.1 總RNA的提取和cDNA的合成
            2.2 標準質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 反應條件的優(yōu)化
            2.4 標準曲線的建立
            2.5 敏感性檢驗
            2.6 重復性分析
            2.7 引物特異性鑒定
        3 試驗結(jié)果
            3.1 目的基因的擴增和標準質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.2 標準質(zhì)粒濃度測定
            3.3 條件優(yōu)化結(jié)果
            3.4 標準曲線的建立
            3.5 敏感性試驗結(jié)果
            3.6 重復性檢測結(jié)果
            3.7 引物特異性試驗結(jié)果
        4 討論
    試驗二 兩種弱毒疫苗對QX型毒株差異保護機理的研究
        1 材料
            1.1 疫苗和毒株
            1.2 主要試劑和儀器
        2 動物試驗
            2.1 EID_(50)的測定
            2.2 動物試驗設計
            2.3 免疫后樣品的采集和檢測
            2.4 攻毒后樣本的采集和檢測
        3 動物試驗結(jié)果
            3.1 病毒EID_(50)的測定結(jié)果
            3.2 免疫后免疫相關指標的測定
            3.3 攻毒后相關指標的測定
        4 分析和討論
            4.1 二免后雞群外周血T淋巴細胞百分含量的分析
            4.2 二免后雞群血清中特異性抗體水平的分析
            4.3 二免后雞群氣管中SIgA抗體水平的分析
            4.4 攻毒后雞群免疫保護率和組織病變的差異分析
            4.5 攻毒后兩株弱毒疫苗對組織保護效果差異分析
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3679260