禽傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis,IB）是由禽傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起家禽的一種急性、高度傳染性疾病,給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前,疫苗免疫接種仍是IB有效的防治措施之一,但I(xiàn)BV容易發(fā)生變異,出現(xiàn)新的血清型和基因型。因此,疫苗對(duì)流行株的免疫保護(hù)效果存在差異。前期研究結(jié)果顯示,常用的兩種弱毒疫苗4/91和H120對(duì)當(dāng)下流行基因型QX型毒株的保護(hù)效果有差異,但是其機(jī)理尚不清楚。本文擬用4/91和H120分別免疫雞群,檢測(cè)免疫后細(xì)胞免疫應(yīng)答、體液免疫應(yīng)答和局部氣管黏膜免疫應(yīng)答的差異,然后用QX型毒株A/CK/MeiShan/17株（簡(jiǎn)稱MS株）進(jìn)行攻毒,統(tǒng)計(jì)發(fā)病率和死亡率、觀察組織病變、檢測(cè)細(xì)胞免疫相關(guān)基因的表達(dá)和攻毒毒株的病毒載量,以期揭示4/91和H120弱毒疫苗的差異保護(hù)的機(jī)理。本文分別構(gòu)建了細(xì)胞免疫相關(guān)的三個(gè)基因（PFP、GAMA、IFN-γ）、內(nèi)參基因（ACTB）和攻毒毒株檢測(cè)基因1a（MS1a）的標(biāo)準(zhǔn)曲線,試驗(yàn)結(jié)果表明:建立的五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線擴(kuò)增效率（E）分別為1.95、2.00、1.... 

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫對(duì)照表
第一部分 文獻(xiàn)綜述及選題意義
    1 雞傳染性支氣管炎概述
        1.1 病原學(xué)
        1.2 IBV的流行趨勢(shì)
        1.3 IBV疫苗的研究進(jìn)展
        1.4 局部黏膜免疫和特異性免疫應(yīng)答
        1.5 IB實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)
    2 研究的目的和意義
第二部分 試驗(yàn)內(nèi)容
    試驗(yàn)一 熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 試驗(yàn)樣品、菌株和毒株
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 常用試劑的配置
            1.4 熒光定量引物的設(shè)計(jì)
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 總RNA的提取和cDNA的合成
            2.2 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化
            2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.5 敏感性檢驗(yàn)
            2.6 重復(fù)性分析
            2.7 引物特異性鑒定
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 目的基因的擴(kuò)增和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.2 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒濃度測(cè)定
            3.3 條件優(yōu)化結(jié)果
            3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            3.5 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
            3.6 重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果
            3.7 引物特異性試驗(yàn)結(jié)果
        4 討論
    試驗(yàn)二 兩種弱毒疫苗對(duì)QX型毒株差異保護(hù)機(jī)理的研究
        1 材料
            1.1 疫苗和毒株
            1.2 主要試劑和儀器
        2 動(dòng)物試驗(yàn)
            2.1 EID_(50)的測(cè)定
            2.2 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3 免疫后樣品的采集和檢測(cè)
            2.4 攻毒后樣本的采集和檢測(cè)
        3 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 病毒EID_(50)的測(cè)定結(jié)果
            3.2 免疫后免疫相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定
            3.3 攻毒后相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定
        4 分析和討論
            4.1 二免后雞群外周血T淋巴細(xì)胞百分含量的分析
            4.2 二免后雞群血清中特異性抗體水平的分析
            4.3 二免后雞群氣管中SIgA抗體水平的分析
            4.4 攻毒后雞群免疫保護(hù)率和組織病變的差異分析
            4.5 攻毒后兩株弱毒疫苗對(duì)組織保護(hù)效果差異分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3679260