從2007年以來,黃海綠潮已經(jīng)連續(xù)爆發(fā)了十二年,對海洋生態(tài)環(huán)境和沿岸居民生活造成了極大的危害和經(jīng)濟(jì)損失。研究表明,石莼屬的滸苔是黃海綠潮優(yōu)勢種。優(yōu)勢種通過表現(xiàn)出對廣泛的輻照度、溫度和鹽度的明顯適應(yīng)性,或?qū)Ω鞣N環(huán)境條件的生理適應(yīng)性,從而獲得競爭優(yōu)勢。植物抗氧化系統(tǒng)的特征之一就是通過提高自身對環(huán)境的耐受性從而表現(xiàn)出廣溫、廣鹽等生長特征。滸苔具有廣溫、廣鹽的生長特征,因此,我們從植物抗氧化脅迫方面入手,選取了抗氧化系統(tǒng)重要成員谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）。通過研究谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶在滸苔中的表達(dá)情況以確定滸苔中的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶是否參與抗氧化脅迫從而提高滸苔對逆境環(huán)境的耐受性。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶是一類在生物體中廣泛存在的蛋白質(zhì)超家族,在解毒抗逆方面具有重要作用,但是之前有關(guān)GST的研究主要集中在動物和高等植物,藻類中的研究較少,有關(guān)滸苔中GST的研究還未見報道。本研究以滸苔為研究對象,在獲得GST基因序列后,通過對基因和蛋白序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,對蛋白進(jìn)行表達(dá)純化和酶活測定等方法,對滸苔GST基因家族進(jìn)行了分子進(jìn)化、基因表達(dá)和蛋白功能分析,獲得了如下結(jié)果:1.滸苔GST基因克隆:通過基因克隆我們得到了 ... 

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明及縮略詞
第一章 緒論
    1.1 黃海綠潮
    1.2 滸苔
        1.2.1 滸苔的進(jìn)化地位
        1.2.2 滸苔形態(tài)特征
        1.2.3 滸苔繁殖方式
    1.3 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶
        1.3.1 GST分類
        1.3.2 GST的命名
        1.3.3 GST的進(jìn)化
        1.3.4 植物GST功能
        1.3.5 GST在生物技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用前景
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 滸苔GST基因的克隆分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗樣品
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
        2.2.3 滸苔GST基因克隆
        2.2.4 GST生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 滸苔GST目的片段的擴(kuò)增
        2.3.2 滸苔GST基因的生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
第三章 滸苔GST蛋白的功能研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌種和質(zhì)粒
        3.1.2 抗生素、生長素
        3.1.3 試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 總RNA的提取
        3.2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
        3.2.3 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.4 重組蛋白的原核表達(dá)
        3.2.5 重組蛋白的純化
        3.2.6 純化后蛋白濃度的測定
        3.2.7 酶活的測定
        3.2.8 滸苔GST基因的定量表達(dá)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 滸苔GST基因表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 重組蛋白的原核表達(dá)
        3.3.3 重組蛋白的純化
        3.3.4 純化后蛋白的濃度測定
        3.3.5 酶活的測定
        3.3.6 滸苔GST基因的定量表達(dá)
    3.4 討論
結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士研究生在讀期間發(fā)表論文
附件



本文編號：3679081