載脂蛋白E（ApoE）是一種多態(tài)性蛋白,參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過程,研究報道ApoE基因多態(tài)性和阿爾茲海默癥、動脈粥樣硬化、降脂藥的代謝都有著密切關(guān)系。目前ApoE基因分型方法如測序、聚合酶鏈式反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性、聚合酶鏈式反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性等,檢測成本高、耗時長、操作復雜,有時需要大型儀器設(shè)備的投入,使這些方法在臨床上的應(yīng)用受到一定限制。本研究針對ApoE基因的特定引物設(shè)計,結(jié)合突變擴增阻滯系統(tǒng)和側(cè)向流層析平臺,建立了一種使用全血直接作為模板進行PCR擴增的基因分型方法,并通過配套的讀卡儀實現(xiàn)了數(shù)字化檢測。全血樣本加處理液即可直接用于PCR擴增,擴增完成后結(jié)合讀卡儀5分鐘就可以判讀檢測結(jié)果。該方法無需DNA提取,整個實驗過程90分鐘完成,靈敏度為1 ng的DNA。收集50例臨床樣本,用本研究所建立的方法和測序法分別進行檢測,兩種方法的符合率為100%,說明本方法準確率高。選取35例特殊的臨床患者（包括高膽紅素、高膽固醇、高甘油三酯、溶血樣本、低濃度白細胞、高濃度白細胞、血液疾�。┑臉颖具M行檢測,其檢出率為100%,說明全血直擴的ApoE基因檢測方法不受相關(guān)干擾因素的影響。通... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 ApoE基因
    1.2 ApoE基因和疾病的關(guān)系
        1.2.1 ApoE基因多態(tài)性和阿爾茨海默癥
        1.2.2 ApoE基因多態(tài)性和動脈粥樣硬化
        1.2.3 ApoE基因多態(tài)性和缺血性腦卒中
        1.2.4 ApoE基因多態(tài)性和藥物代謝及其他疾病的關(guān)聯(lián)
    1.3 SNP基因分型技術(shù)
    1.4 直擴PCR技術(shù)概述
        1.4.1 直擴PCR技術(shù)
        1.4.2 直擴PCR技術(shù)的進展
        1.4.3 直擴PCR技術(shù)的瓶頸
    1.5 論文立題依據(jù)和主要工作
        1.5.1 立題意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
        1.5.3 主要創(chuàng)新點
第二章 ApoE基因陽性質(zhì)控體系的建立
    2.1 實驗原理
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗試劑及儀器
        2.2.2 試劑的配制
    2.3 實驗方法與結(jié)果
        2.3.1 克隆引物的設(shè)計及合成
        2.3.2 目的DNA片段的制備
        2.3.3 目的片段克隆
        2.3.4 測序驗證
    2.4 本章小結(jié)
第三章 全血直擴的ApoE基因分型方法的建立
    3.1 實驗原理
    3.2 實驗儀器、材料與試劑
        3.2.1 實驗儀器
        3.2.2 實驗材料與試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 特異性引物的設(shè)計及篩選
        3.3.2 特異性產(chǎn)物的初步獲取
        3.3.3 全血樣本的處理
        3.3.4 PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.3.5 PCR擴增體系的優(yōu)化
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 特異性引物的設(shè)計及篩選
        3.4.2 全血樣本的處理
        3.4.3 PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.4.4 PCR擴增體系的優(yōu)化
        3.4.5 最終確定的反應(yīng)體系
    3.5 本章小結(jié)
第四章 讀卡儀判讀基因型的研究
    4.1 實驗原理
    4.2 儀器及樣本
    4.3 實驗方法
        4.3.1 檢測流程及結(jié)果判讀流程
        4.3.2 參數(shù)確定
    4.4 結(jié)果與分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 性能評估
    5.1 實驗原理
    5.2 實驗試劑及儀器
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 主要儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 準確性
        5.3.2 特異性
        5.3.3 靈敏度
        5.3.4 批間差
    5.4 實驗結(jié)果
        5.4.1 準確性
        5.4.2 特異性
        5.4.3 靈敏度
        5.4.4 批間差
    5.5 本章小結(jié)
第六章 臨床應(yīng)用研究
    6.1 實驗原理
    6.2 實驗試劑及儀器
        6.2.1 主要試劑
        6.2.2 主要儀器
    6.3 實驗方法
        6.3.1 臨床樣本對該方法的評價
        6.3.2 特殊干擾樣本對該方法的評價
        6.3.3 ApoE基因多態(tài)性與缺血性腦卒中相關(guān)性研究
    6.4 實驗結(jié)果
        6.4.1 臨床樣本驗證結(jié)果
        6.4.2 特殊干擾樣本的檢測結(jié)果
        6.4.3 關(guān)聯(lián)分析結(jié)果
    6.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3673510