南極海冰獨特的地理位置,使其具有低溫、強紫外線和高鹽度等特點,這些特點會使生物體內(nèi)的超氧陰離子自由基(O^2-.)和活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）聚集,形成氧化應激,因此生活在南極的生物為了適應南極海冰的環(huán)境,通過產(chǎn)生低溫抗氧化酶,來消除外界環(huán)境引起的氧化應激,保護細胞免受氧化應激的損傷。其中谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶（Glutathione S-transferase,GST）和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）是生物體內(nèi)兩種重要的抗氧化酶,在化妝品、醫(yī)藥以及低溫食品抗氧化劑等方面具有廣泛的應用前景。因此本文以南極海冰細菌Halomonas sp.ANT108為研究對象,對其體內(nèi)的gst和sod基因進行研究,以期為以后開發(fā)南極來源的低溫抗氧化酶提供理論基礎(chǔ)。本文通過克隆南極海冰細菌Halomonas sp.ANT108中的gst基因,并對其進行生物信息學分析可知,該基因全長603 bp,命名為hsgst,可編碼一個包含200個氨基酸的蛋白質(zhì),命名為Hs GST。預測的蛋白分子量為21.76 k Da,理論等... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫表
第1章 緒論
    1.1 南極微生物和活性物質(zhì)現(xiàn)狀
        1.1.1 南極來源酶研究進展
        1.1.2 南極抗氧化酶系統(tǒng)研究現(xiàn)狀
    1.2 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶研究現(xiàn)狀
        1.2.1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶來源及酶學特性
        1.2.2 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的功能及應用
    1.3 超氧化物歧化酶的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 超氧化物歧化酶的來源及分類
        1.3.2 超氧化物歧化酶的功能及應用
    1.4 課題來源和研究的目的意義及內(nèi)容
        1.4.1 課題來源
        1.4.2 研究目的及意義
        1.4.3 課題主要研究內(nèi)容
第2章 GST的克隆表達及酶學特性研究
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 南極海冰樣品及載體來源
        2.2.2 主要儀器設備
        2.2.3 試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基
    2.3 方法
        2.3.1 gst基因的克隆
        2.3.2 gst基因的生物信息學分析與同源建模
        2.3.3 表達菌株pET-gst的構(gòu)建
        2.3.4 rHsGST的異源表達及純化
        2.3.5 rHsGST的性質(zhì)測定
        2.3.6 紙片擴散法
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 菌株的篩選及PCR擴增
        2.4.2 T-A克隆
        2.4.3 gst基因的生物信息學分析與同源建模
        2.4.4 rHsGST的異源表達及純化
        2.4.5 溫度對rHsGST活性的影響
        2.4.6 pH對 rHsGST活性的影響
        2.4.7 不同試劑對rHsGST活性的影響
        2.4.8 鹽濃度對rHsGST活性的影響
        2.4.9 rHsGST的動力學和熱力學參數(shù)
        2.4.10 紙片擴散實驗
    2.5 本章小結(jié)
第3章 SOD的克隆表達及酶學特性研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 南極海冰樣品及載體來源
        3.2.2 主要儀器設備
        3.2.3 試劑
        3.2.4 培養(yǎng)基
    3.3 方法
        3.3.1 sod基因的克隆
        3.3.2 sod基因的生物信息學分析與同源建模
        3.3.3 表達菌株pET-sod的構(gòu)建
        3.3.4 rHsSOD的異源表達及純化
        3.3.5 rHsSOD的性質(zhì)測定
        3.3.6 重組菌株的鹽脅迫耐受性測定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 菌株的篩選及PCR擴增
        3.4.2 T-A克隆
        3.4.3 sod基因的生物信息學分析與同源建模
        3.4.4 rHsSOD的異源表達及純化
        3.4.5 溫度對rHsSOD活性的影響
        3.4.6 p H對 rHsSOD活性的影響
        3.4.7 不同試劑對rHsSOD活性的影響
        3.4.8 鹽濃度對rHsSOD活性的影響
        3.4.9 rHsSOD的動力學和熱力學參數(shù)
        3.4.10 rHsSOD的類型鑒定
        3.4.11 重組菌株的鹽脅迫耐受性測定
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Characterization of the Purified Glutathione S-transferases from Two Psocids Liposcelis bostrychophila and L.entomophila[J]. DOU Wei,XIAO Li-sha,NIU Jin-zhi,JIANG Hong-bo and WANG Jin-jun Key Laboratory of Entomology and Pest Control Engineering,College of Plant Protection,Southwest University,Chongqing 400716,P.R.China.  Agricultural Sciences in China. 2010(07)
[2]鄰苯三酚自氧化法測定抗氧化活性的方法研究[J]. 韓少華,朱靖博,王妍妍.  中國釀造. 2009(06)
[3]溫度對南極紅酵母Rhodotorula sp. NJ298抗氧化系統(tǒng)及質(zhì)膜流動性的影響[J]. 劉均玲,黃勃,李江,李光友,繆錦來.  中國海洋藥物. 2007(04)
[4]谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)與功能研究進展[J]. 楊海靈,聶力嘉,朱圣庚,周先碗.  成都大學學報(自然科學版). 2006(01)



本文編號：3661987