鐵是真核細(xì)胞的一種至關(guān)重要的元素,對一些重要的細(xì)胞功能如DNA的合成與修復(fù)、呼吸作用以及自由基的解毒作用等也是必需的。雖然地殼的含鐵量非常豐富,但由于在中性pH的需氧環(huán)境中鐵的溶解度有限,因而能被生物體直接利用的有效鐵含量很低。在長期的進(jìn)化過程中,某些植物和微生物能夠產(chǎn)生一種在低鐵的環(huán)境中特異性地螯合三價鐵離子的小分子有機(jī)化合物嗜鐵素,將土壤中難溶性的鐵轉(zhuǎn)化為生物體可利用的鐵。雖然本實驗室對胞外嗜鐵素在生防、促生等方面做了一些研究,但對其合成的分子機(jī)制以及促生機(jī)制尚不明確,有待于進(jìn)一步研究。木霉菌（Trichoderma spp.）是當(dāng)前綠色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最具應(yīng)用潛力的生防微生物之一,能夠產(chǎn)生具有吸收、貯存和胞內(nèi)運(yùn)輸鐵的功能以及對菌體本身生長發(fā)育有重要作用的嗜鐵素。本研究以實驗室分離鑒定的高產(chǎn)嗜鐵素菌株棘孢木霉菌（Trichoderma asperellum）T6為材料,展開了以下幾方面的研究:1、為了明確棘孢木霉菌嗜鐵素合成的關(guān)鍵基因,首先,通過棘孢木霉菌野生型菌株（WT）在缺鐵培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)并測定每天的嗜鐵素相對含量的實驗,發(fā)現(xiàn)在第5 d時,嗜鐵素相對含量達(dá)到最大值37.53%,隨后趨... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鐵元素的重要性
    1.2 嗜鐵素
        1.2.1 嗜鐵素的類型與測定
        1.2.2 真菌嗜鐵素的類型與結(jié)構(gòu)
        1.2.3 嗜鐵素的潛在應(yīng)用
    1.3 嗜鐵素合成相關(guān)基因及其研究進(jìn)展
        1.3.1 嗜鐵素合成的相關(guān)基因
        1.3.2 嗜鐵素合成相關(guān)基因研究進(jìn)展
    1.4 DOUBLE-JOINTPCR技術(shù)原理及應(yīng)用
    1.5 本研究的立題依據(jù)、研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 研究內(nèi)容
        1.5.3 技術(shù)路線
第二章 棘孢木霉菌T6嗜鐵素相關(guān)基因SIDA
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 供試菌株
            2.1.1.2 工具酶和主要試劑
            2.1.1.3 培養(yǎng)基
            2.1.1.4 主要溶液配方
            2.1.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 實驗方法
            2.1.2.1 嗜鐵素定量測定
            2.1.2.2 棘孢木霉菌sidA基因的預(yù)測和生物信息學(xué)分析
            2.1.2.3 棘孢木霉菌T6的培養(yǎng)和保存
            2.1.2.4 棘孢木霉菌T6孢子懸液的制備
            2.1.2.5 棘孢木霉T6發(fā)酵液中單位質(zhì)量嗜鐵素相對含量的測定
            2.1.2.6 嗜鐵素合成基因sidA的RT-PCR測定
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 嗜鐵素定量測定
        2.2.2 棘孢木霉菌SIDA基因的預(yù)測分析
        2.2.3 棘孢木霉T6發(fā)酵液中單位質(zhì)量嗜鐵素相對含量的測定
        2.2.4 嗜鐵素合成基因SIDA的RT-PCR測定
    2.3 討論
第三章 嗜鐵素合成相關(guān)基因SIDA的基因敲除
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
            3.1.1.1 供試菌株和載體
            3.1.1.2 工具酶和主要試劑
            3.1.1.3 培養(yǎng)基
            3.1.1.4 主要溶液和緩沖液配制
            3.1.1.5 主要儀器設(shè)備
            3.1.1.6 PCR引物
        3.1.2 實驗方法
            3.1.2.1 棘孢木霉菌T6對潮霉素B敏感性測定
            3.1.2.2 構(gòu)建敲除載體
            3.1.2.3 棘孢木霉菌sidA基因敲除
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 棘孢木霉菌T6對潮霉素B敏感性測定
        3.2.2 突變體的PCR驗證
        3.2.3 突變體的SOUTHERN驗證
    3.3 討論
第四章 棘孢木霉菌SIDA基因敲除突變體表型分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
            4.1.1.1 供試菌株
            4.1.1.2 培養(yǎng)基
            4.1.1.3 主要儀器設(shè)備
        4.1.2 實驗方法
            4.1.2.1 野生型與突變體嗜鐵素差異
            4.1.2.2 菌落生長速度測定
            4.1.2.3 產(chǎn)孢量與孢子萌發(fā)測定
            4.1.2.4 脅迫敏感性測定
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 野生型與突變體嗜鐵素差異
        4.2.2 菌落生長速度測定
        4.2.3 產(chǎn)孢量與孢子萌發(fā)測定
            4.2.3.1 產(chǎn)孢量測定
            4.2.3.2 孢子萌發(fā)測定
        4.2.4 脅迫敏感性測定
    4.3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3661149