硒是人體必需的14種微量元素之一,具有多種生理功能。缺硒可導(dǎo)致多種疾病。通過日常膳食進(jìn)行合理補硒是行之有效的方法。小麥?zhǔn)抢硐氲母晃澄?一粒小麥（Triticum monococcum L,AA,）是六倍體普通小麥（Triticum aestivum AABBDD）A基因組的供體種,擁有大量現(xiàn)代普通小麥所不具備的對作物產(chǎn)量、品質(zhì)和抗性有貢獻(xiàn)的基因,是一個有待開發(fā)的寶貴基因資源庫。本文以一粒小麥（Triticum monococcum L,AA,）為研究對象,從野生一粒小麥10-1中分離到同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因（Homocysteine S-Methyltransferases gene,HMT）,命名為TmHMT1,系統(tǒng)研究了TmHMT1基因的生物信息學(xué)特征、生化特性,初步研究了該蛋白在大腸桿菌中的生理功能。本研究為富硒小麥新材料的創(chuàng)制和富硒小麥新品種培育提供理論基礎(chǔ)和育種元件。結(jié)論如下:1.從野生一粒小麥（Triticum monococcum L,AA）10-1中克隆到HMT1基因,命名為TmHMT1,TmHMT1基因ORF全長975bp。推測TmHMT1基因編碼324個氨基酸... 

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【學(xué)位級別】：碩士

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第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 植物硒吸收代謝的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物對硒的吸收
        1.2.2 硒在植物體內(nèi)的形式
        1.2.3 硒對植物的影響
        1.2.4 同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(HMT)的研究進(jìn)展
    1.3 富硒小麥的研究進(jìn)展
        1.3.1 小麥硒營養(yǎng)的研究進(jìn)展
        1.3.2 富硒小麥的培育
            1.3.2.1 硒液浸種
            1.3.2.2 土壤施硒或葉面噴施
            1.3.2.3 生物強化
    1.4 小麥分子育種的重要材料:一粒小麥
    1.5 論文選題依據(jù)
    1.6 主要研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.6.1 主要研究內(nèi)容
        1.6.2 技術(shù)路線
第二章 野生一粒小麥HMT1基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 實驗儀器、試劑
        2.2.3 提取植物總RNA
        2.2.4 RNA完整性檢測
        2.2.5 總RNA純度檢測
        2.2.6 引物設(shè)計
        2.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.8 PCR擴(kuò)增野生一粒小麥10-1HMT1 基因
        2.2.9 目的片段的回收
        2.2.10 加“A”
        2.2.11 pGEM-T Easy載體鏈接
        2.2.12 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)DH5α細(xì)胞
        2.2.13 重組克隆篩選
        2.2.14 穿刺
        2.2.15 送樣測序
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 野生一粒小麥10-1HMT1 基因的克隆和序列分析
            2.3.1.1 RNA提取檢測結(jié)果
            2.3.1.2 PCR檢測結(jié)果
            2.3.1.3 目的片段回收結(jié)果
            2.3.1.4 T載體鏈接產(chǎn)物做E.coli細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)果
            2.3.1.5 菌落PCR陽性篩選結(jié)果
        2.3.2 TmHMT1 基因序列與AetHMT1 基因比對分析
        2.3.3 TmHMT1 同源性比對分析
    2.4 討論與結(jié)論
第三章 野生一粒小麥HMT1 基因的生化特性分析
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 設(shè)計特異性引物及PCR擴(kuò)增
        3.2.2 實驗試劑及儀器
        3.2.3 搖菌后培養(yǎng)
        3.2.4 提取克隆質(zhì)粒
        3.2.5 獲得大量目的片段
        3.2.6 酶切、連接目的條帶,構(gòu)建重組原核表達(dá)載體
        3.2.7 誘導(dǎo)表達(dá)重組質(zhì)粒菌株及優(yōu)化表達(dá)條件
        3.2.8 SDS-PAGE鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 野生一粒小麥10-1HMT1 基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和重組子的鑒定
            3.3.1.1 提取克隆質(zhì)粒結(jié)果
            3.3.1.2 質(zhì)粒PCR結(jié)果
            3.3.1.3 質(zhì)粒PCR膠回收結(jié)果
            3.3.1.4 將回收片段和pET-30a-c(+)質(zhì)粒雙酶切后鑒定結(jié)果
            3.3.1.5 載體鏈接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)結(jié)果
            3.3.1.6 鏈接產(chǎn)物菌落PCR陽性篩選結(jié)果
        3.3.2 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、條件優(yōu)化及SDS-PAGE分析
    3.4 討論與結(jié)論
第四章 野生一粒小麥HMT1 基因的功能驗證
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 實驗試劑及儀器
        4.2.3 TmHMT1 基因時空特性分析
            4.2.3.1 反轉(zhuǎn)錄成c DNA第一鏈
            4.2.3.2 qPCR反應(yīng)利用
            4.2.3.3 qPCR結(jié)果分析
        4.2.4 轉(zhuǎn)TmHMT1 基因細(xì)菌耐硒性研究
        4.2.5 轉(zhuǎn)TmHMT1 基因細(xì)菌富硒性研究
        4.2.6 樣品消解
        4.2.7 儀器條件
        4.2.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        4.2.9 樣品測定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 轉(zhuǎn)TmHMT1 基因細(xì)菌耐硒性分析
        4.3.2 轉(zhuǎn)TmHMT1 基因細(xì)菌富硒性分析
        4.3.3 TmHMT1 基因時空表達(dá)特性研究
    4.4 討論與結(jié)論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同濃度硒對煙草根系形態(tài)、生長素含量及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 羅勇,劉勝波,張濤,王立志,軒棟棟,徐滌寒,邵惠芳,賈宏昉.  煙草科技. 2019(07)
[2]Engineering purple rice for human health[J]. Xin Fang,Yingbo Mao,Xiaoya Chen.  Science China（Life Sciences）. 2018(03)
[3]富硒小麥栽培技術(shù)探究[J]. 袁同高,段建華.  南方農(nóng)機(jī). 2018(01)
[4]四倍體小麥Langdon HMT1基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 吳麗軍,尚玥,劉韜,陳文杰,劉寶龍,張連全,劉登才,張波,張懷剛.  麥類作物學(xué)報. 2017(09)
[5]小麥優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)[J]. 張沖,武金燚,張振衛(wèi),康香輝,宋春景.  現(xiàn)代農(nóng)村科技. 2017(09)
[6]硒的自然分布及植物對硒的吸收轉(zhuǎn)運轉(zhuǎn)化機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 程兆東,王喜東.  中國農(nóng)業(yè)信息. 2017(11)
[7]小麥富硒研究進(jìn)展[J]. 于麗敏,薛艷芳,高華鑫,陳璐,張丙春,夏海勇.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(06)
[8]水稻富硒施肥技術(shù)[J]. 陸興倫,李其星.  農(nóng)家之友. 2014(11)
[9]硒在植物抗逆境脅迫耐受中的作用[J]. 吳之琳,尹雪斌,袁林喜,劉穎,李淼.  糧食科技與經(jīng)濟(jì). 2014(03)
[10]茶樹硒代半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因生物信息學(xué)分析[J]. 劉聲傳,鄢東海,魏杰.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2013(06)

博士論文
[1]水稻和小麥對有機(jī)硒的吸收、轉(zhuǎn)運及形態(tài)轉(zhuǎn)化機(jī)制[D]. 王琪.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]茶樹根系硒吸收和代謝的關(guān)鍵基因發(fā)掘與分析[D]. 胡玉榮.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[2]不同硒源對小麥和油菜生長及硒累積的影響[D]. 付小麗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]春油菜硒吸收富集特性研究[D]. 吳麗軍.青海大學(xué) 2013
[4]不同外源硒對冬小麥硒吸收、分配和轉(zhuǎn)運的影響[D]. 付冬冬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2011



本文編號：3657606