天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 科技論文 > 基因論文 >

乳桿菌bsh基因的高效表達(dá)及高活性酶蛋白獲得

發(fā)布時(shí)間:2022-07-11 12:03
  目的探討乳桿菌bsh基因的高效表達(dá)及膽鹽水解酶(BSH)的高活性酶蛋白獲得。方法從本實(shí)驗(yàn)室保存的12株乳桿菌菌株中,通過Ca2+沉淀法初篩獲得具BSH活性的菌株,根據(jù)GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳桿菌的BSH全基因序列,設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增獲得bsh基因并克隆至表達(dá)載體pET-28α,構(gòu)建BL21-pET-28α-bsh原核表達(dá)體系。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE分析及Western blot驗(yàn)證。結(jié)果研究表明在分子質(zhì)量大小約35、37 kD處有預(yù)期條帶出現(xiàn),初步表明BSH蛋白表達(dá)成功。進(jìn)而對表達(dá)各條件進(jìn)行優(yōu)化,最佳酶活條件為IPTG濃度0.1 mmol/L、誘導(dǎo)pH 6.5、誘導(dǎo)溫度37℃、誘導(dǎo)時(shí)間1 h。經(jīng)鎳柱親和層析純化制備BSH制劑,鄰苯三酚紅鉬法蛋白濃度測定為1 446 mg/dL,茚三酮法測酶活性最高可達(dá)21 248.27 U/(g·prot),為純化前的635.4倍。結(jié)論乳桿菌bsh基因可溶性表達(dá)成功且高酶活BSH純化獲取為進(jìn)一步的研究和藥物轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】:7 頁

【文章目錄】:
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株及質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 具有膽鹽水解酶的乳桿菌菌株
        1.2.2 不同菌株對膽固醇去除率的測定
        1.2.3 乳桿菌總DNA的提取
        1.2.4 16S rRNA鑒定乳桿菌菌種
        1.2.5 不同乳桿菌bsh基因的擴(kuò)增
        1.2.6 bsh基因的克隆與轉(zhuǎn)化子驗(yàn)證
        1.2.7 bsh基因原核表達(dá)體系的構(gòu)建
        1.2.8 BSH蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.9 重組蛋白的Western blot驗(yàn)證
        1.2.10 原核表達(dá)條件的優(yōu)化
        1.2.11 鎳柱親和層析純化BSH及SDS-PAGE檢測
        1.2.12 茚三酮法測定BSH純酶制劑酶活性單位
    1.3 統(tǒng)計(jì)方法
2 結(jié) 果
    2.1 MRS-THIO-OX培養(yǎng)基中產(chǎn)BSH菌株篩選
    2.2 不同乳桿菌的BSH酶對膽固醇去除效果比較
    2.3 16S rRNA乳桿菌鑒定
    2.4 bsh基因的擴(kuò)增
    2.5 重組蛋白BSH的SDS-PAGE鑒定
    2.6 重組蛋白的Western blot分析
    2.7 BSH蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.8 BSH 酶活的再次驗(yàn)證
    2.9 BSH酶制劑的純化與SDS-PAGE分析
    2.10 BSH酶活性單位測定(茚三酮法)
3 討 論
    3.1 結(jié)果分析
    3.2 研究的意義


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]雙歧桿菌膽鹽水解酶基因的重組表達(dá)、純化與酶學(xué)性質(zhì)[J]. 周曉玲,張娟,陳堅(jiān),堵國成.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2016(08)
[2]膽鹽水解酶基因結(jié)構(gòu)與功能研究現(xiàn)狀[J]. 黃艷娜,任婧.  乳業(yè)科學(xué)與技術(shù). 2015(02)
[3]乳酸菌降膽固醇作用研究進(jìn)展[J]. 廖宇欣,錢麗麗,于長青.  農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊). 2013(08)



本文編號(hào):3658130

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/3658130.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶4cda7***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
在线一区二区免费的视频| 激情少妇一区二区三区| 中文字幕一区二区三区中文| 最新69国产精品视频| 日韩欧美二区中文字幕| 欧洲日本亚洲一区二区| 国产成人精品一区在线观看| 欧美偷拍一区二区三区四区 | 欧美精品亚洲精品一区| 国产成人综合亚洲欧美日韩| 人妻乱近亲奸中文字幕| 亚洲欧洲一区二区中文字幕| 亚洲中文字幕免费人妻| 日本国产欧美精品视频| 亚洲少妇人妻一区二区| 久久婷婷综合色拍亚洲| 日本不卡一本二本三区| 大胆裸体写真一区二区| 日韩女优精品一区二区三区| 中文字幕亚洲在线一区| 精品少妇人妻av一区二区蜜桃 | 日韩综合国产欧美一区| 小黄片大全欧美一区二区| 草草草草在线观看视频| 国产精品亚洲综合色区韩国| 日本免费一级黄色录像| 激情少妇一区二区三区| 久久久精品日韩欧美丰满| 国产精品伦一区二区三区四季| 99久久精品免费精品国产| 美女黄色三级深夜福利| 亚洲黄色在线观看免费高清| 久久人妻人人澡人人妻| 日本成人中文字幕一区| 日本少妇aa特黄大片| 国产免费无遮挡精品视频| 免费大片黄在线观看国语| 国产精品久久三级精品| 日本不卡片一区二区三区| 国产精品香蕉一级免费| 激情五月天深爱丁香婷婷|