發(fā)布時間：2022-05-12 18:06

　　桑樹不僅是家蠶的飼料樹種,也是蠶絲產(chǎn)業(yè)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。桑樹除可供采葉養(yǎng)蠶外,還具有很高的食用、藥用、飼用和生態(tài)價值。桑樹在生長發(fā)育過程中經(jīng)常會受到一些病原微生物的侵染,嚴(yán)重影響蠶業(yè)生產(chǎn)發(fā)展以及桑樹生態(tài)和經(jīng)濟價值的實現(xiàn)。發(fā)掘桑樹抗病基因,利用基因工程技術(shù)培育抗病桑樹新品種,有利于充分發(fā)揮桑樹的經(jīng)濟和生態(tài)作用。應(yīng)激響應(yīng)A/B桶結(jié)構(gòu)域蛋白HS1基因作為一類應(yīng)激響應(yīng)基因與植物的系統(tǒng)獲得性抗性密切相關(guān),但其具體的生物功能和作用機制還不清楚。本研究根據(jù)獲得的桑樹轉(zhuǎn)錄組信息,克隆得到了桑樹應(yīng)激響應(yīng)A/B桶結(jié)構(gòu)域蛋白HS1基因Mul-HS1,并對其生物學(xué)功能進行了研究;同時擴增了Mul-HS1基因的啟動子,對其誘導(dǎo)表達活性進行了分析,探討了Mul-HS1基因的表達調(diào)控方式。研究結(jié)果可望為桑樹抗病育種提供候選基因,同時也為應(yīng)激響應(yīng)A/B桶結(jié)構(gòu)域蛋白HS1基因功能和作用機制的研究奠定了基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下:（1）桑樹應(yīng)激響應(yīng)A/B桶結(jié)構(gòu)域蛋白HS1基因Mul-HS1的功能本研究克隆了桑樹應(yīng)激響應(yīng)A/B桶結(jié)構(gòu)域蛋白HS1基因（Mul-HS1）,該基因編碼的蛋白質(zhì)包含有110個氨基酸,理論分子質(zhì)量為12.... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 應(yīng)激響應(yīng)蛋白研究進展
        1.1.1 植物應(yīng)激蛋白的主要類型
        1.1.2 植物應(yīng)激蛋白的功能
    1.2 熱穩(wěn)定蛋白研究進展
        1.2.1 熱穩(wěn)定蛋白的主要類型及特點
        1.2.2 熱穩(wěn)定蛋白的功能
    1.3 研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 試劑
        2.1.4 PCR引物
        2.1.5 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 桑樹葉片RNA的提取
        2.2.2 cDNA的合成
        2.2.3 Mul-HS1 基因的PCR擴增及生物信息學(xué)分析
        2.2.4 Mul-HS1 植物表達載體的構(gòu)建
        2.2.5 農(nóng)桿菌GV3101 感受態(tài)的轉(zhuǎn)化
        2.2.6 擬南芥的侵染和轉(zhuǎn)基因植株的篩選與鑒定
        2.2.7 Mul-HS1 基因的熒光定量PCR
        2.2.8 Mul-HS1 蛋白質(zhì)的亞細胞定位觀察
        2.2.9 轉(zhuǎn)Mul-HS1 基因植株表型分析
        2.2.10 轉(zhuǎn)Mul-HS1 基因植株的抗病性分析
        2.2.11 Mul-HS1 互作蛋白預(yù)測及分析
        2.2.12 Mul-HS1 啟動子克隆及信息學(xué)分析
        2.2.13 啟動子植物表達載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2.2.14 啟動子的誘導(dǎo)表達特性分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 桑樹Mul-HS1 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.1.1 Mul-HS1 基因克隆
        3.1.2 Mul-HS1 蛋白的氨基酸組成及結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.1.3 Mul-HS1 蛋白的理化性質(zhì)分析
        3.1.4 Mul-HS1 蛋白的翻譯后修飾位點預(yù)測
        3.1.5 Mul-HS1 蛋白序列的同源性和進化分析
    3.2 Mul-HS1 基因的組織表達特性分析
    3.3 Mul-HS1 蛋白質(zhì)的亞細胞定位分析
        3.3.1 Mul-HS1-GFP融合基因植物表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 瞬時表達Mul-HS1-GFP蛋白進行亞細胞定位分析
    3.4 Mul-HS1 基因的生物學(xué)功能分析
        3.4.1 Mul-HS1 植物表達載體的構(gòu)建
        3.4.2 轉(zhuǎn)Mul-HS1 基因擬南芥的獲得
        3.4.3 轉(zhuǎn)Mul-HS1 基因擬南芥的表型分析
        3.4.4 轉(zhuǎn)Mul-HS1 基因擬南芥的抗病性分析
    3.5 Mul-HS1 基因啟動子的克隆及活性分析
        3.5.1 Mul-HS1 基因啟動子的克隆
        3.5.2 啟動子pMul-HS1 的調(diào)控元件分析
        3.5.3 pMul-HS1 啟動子植物表達載體的構(gòu)建
        3.5.4 pBI121-pMul-HS1表達載體轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌GV3101
        3.5.5 pMul-HS1 啟動子的誘導(dǎo)表達活性分析
4 討論
    4.1 應(yīng)激響應(yīng)A/B桶狀結(jié)構(gòu)域蛋白HS1 的表達模式
    4.2 應(yīng)激響應(yīng)A/B桶狀結(jié)構(gòu)域蛋白HS1 的功能和作用機制
5 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
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本文編號：3652755