目的探討慢病毒介導的AP-1基因沉默對卵巢癌SKOV3細胞增殖、凋亡以及Survivin表達的影響。方法基于RNA干擾技術構建慢病毒載體AP-1-shRNA,測定病毒滴度。實時熒光定量PCR及Western blot驗證并篩選AP-1-shRNA沉默AP-1效果。將沉默效果最佳的載有AP-1-shRNA的慢病毒感染SKOV3細胞作為實驗組,未感染病毒及感染空載體病毒SKOV3細胞作為對照組,用MTT法及Annexin V-APC觀察SKOV3細胞增殖、凋亡情況,并用實時熒光定量PCR、Western blot檢測SKOV3細胞Survivin表達。結果經(jīng)測序證實,成功構建AP-1-shRNA-1/2/3三組慢病毒,病毒滴度均大于2×10⁸ TU/mL。實時熒光定量PCR及Western blot驗證三組病毒均能在mRNA及蛋白水平沉默AP-1的表達,其中AP-1-shRNA-3沉默效果最佳,用于后續(xù)實驗。沉默AP-1后,SKOV3細胞增殖受到抑制、凋亡增加、Survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平降低。結論慢病毒介導的AP-1基因沉默可致卵巢癌SKOV3細... 

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞及主要主要試劑
    1.2 制備RNA干擾慢病毒
    1.3 慢病毒包裝和病毒滴度的測定
    1.4 慢病毒感染SKOV3細胞
    1.5 細胞分組
    1.6 MTT檢測SKOV3細胞增殖
    1.7 流式細胞術檢測SKOV3細胞凋亡
    1.8 實時熒光定量PCR檢測SKOV3細胞Survivin mRNA表達
    1.9 Western Blot檢測SKOV3細胞Survivin蛋白表達
    1.10 統(tǒng)計學處理
2 結果
    2.1 重組干擾載體酶切及測序鑒定結果
    2.2 慢病毒滴度測定
    2.3 慢病毒感染SKOV3細胞陽性率測定
    2.4 AP-1-shRNA在mRNA及蛋白水平沉默AP-1效果
    2.5 MTT法檢測SKOV3細胞增殖情況
    2.6 流式細胞術檢測細胞凋亡
    2.7 實時熒光定量PCR檢測SKOV3細胞Survivin mRNA表達情況
    2.8 Western Blot檢測SKOV3細胞Survivin蛋白表達水平
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]凋亡調(diào)控因子Survivin、XIAP以及c-Jun、NF-κB在卵巢上皮性腫瘤中的表達及意義[D]. 鄧霖.遵義醫(yī)學院 2011



本文編號：3646558