發(fā)布時(shí)間：2022-02-27 09:11

　　Akirin基因家族在骨骼肌發(fā)育上具有重要作用。該基因家族有兩個(gè)成員,Akirin1和Akirin2,研究報(bào)道鳥類基因組僅含有一個(gè)成員Akirin2。為研究鳥類Akirin2基因的功能,在鴨成肌細(xì)胞中過表達(dá)Akirin2基因、異源表達(dá)鼠Akirin1基因后,結(jié)合熒光定量、免疫熒光、蛋白印跡以及流式細(xì)胞術(shù)等手段,研究了Akirin2基因在鴨成肌細(xì)胞中的作用。主要研究結(jié)果如下:（1）將鼠Akirin1與Akirin2基因分別與多個(gè)鳥類基因組比對分析,僅在鳥類基因組中發(fā)現(xiàn)一個(gè)Akirin同源基因。該同源基因與鼠Akirin2基因有著80%以上的同源性,而與鼠Akirin1基因僅有41%⁴5%的同源性。進(jìn)化樹結(jié)果顯示,所選鳥類Akirin同源基因與其他物種Akirin2聚為一類。結(jié)構(gòu)功能域分析結(jié)果顯示,所選鳥類Akirin結(jié)構(gòu)域與其他物種Akirin2高度相似。（2）通過低濃度馬血清成功將鴨成肌細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。成功構(gòu)建鴨Akirin2基因真核表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)染至鴨成肌細(xì)胞后,生肌調(diào)控因子（MRFs）、肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2（MEF2s）基因家族各成員的表達(dá)量、細(xì)胞周期的退出與... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省211工程院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 成肌細(xì)胞與生肌調(diào)控
        1.1 成肌細(xì)胞的起源
        1.2 成肌細(xì)胞的增殖與分化過程
        1.3 調(diào)控成肌細(xì)胞增殖與分化的關(guān)鍵因子
            1.3.1 生肌調(diào)控因子
                1.3.1.1 生肌決定因子(MyoD)
                1.3.1.2 成肌因子5(Myf5)
                1.3.1.3 肌細(xì)胞生成素(MyoG)
                1.3.1.4 成肌調(diào)節(jié)因子4(MRF4)
            1.3.2 肌細(xì)胞増強(qiáng)因子2(Myocyte Enhacer Factors2,MEF2s)
                1.3.2.1 肌細(xì)胞増強(qiáng)因子2A(MEF2A)
                1.3.2.2 肌細(xì)胞増強(qiáng)因子2B(MEF2B)
                1.3.2.3 肌細(xì)胞増強(qiáng)因子2C(MEF2C)
                1.3.2.4 肌細(xì)胞増強(qiáng)因子2D(MEF2D)
            1.3.3 細(xì)胞周期調(diào)控因子
        1.4 調(diào)控成肌細(xì)胞增殖與分化的信號通路
            1.4.1 MAPK信號通路
            1.4.2 PI3K/Akt信號通路
    2 Akirin基因家族研究進(jìn)展
        2.1 發(fā)現(xiàn)與成員命名
        2.2 基因組結(jié)構(gòu)組成及分子進(jìn)化
        2.3 表達(dá)模式
        2.4 主要功能
            2.4.1 Akirin基因與骨骼肌發(fā)育
            2.4.2 Akirin基因與先天性免疫
            2.4.3 Akirin基因與腫瘤發(fā)生
    3 鳥類Akirin2 基因研究進(jìn)展
    4 研究內(nèi)容和目的意義及研究思路
        4.1 研究內(nèi)容和目的意義
        4.2 技術(shù)路線
第二章 Akirin基因家族分子進(jìn)化分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 所用網(wǎng)站
        2.2 所用軟件
        2.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    3 結(jié)果與分析
        3.1 鳥類Akirin基因blast比對分析
        3.2 Akirin基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.3 Akirin基因家族保守蛋白結(jié)構(gòu)域分析
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 過表達(dá)Akirin2 對鴨成肌細(xì)胞分化的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)動物與試劑
            2.1.1 試驗(yàn)動物
            2.1.2 藥品和試劑
            2.1.3 主要試驗(yàn)儀器
            2.1.4 常用試劑配制
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 總RNA的提取及質(zhì)量檢測
            2.2.2 cDNA的合成
            2.2.3 鴨Akirin2 基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及酶切鑒定
            2.2.4 鴨成肌細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.5 鴨成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化
            2.2.6 成肌細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.2.8 Western Blot
            2.2.9 細(xì)胞周期測定
            2.2.10 My HC免疫熒光染色
        2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 鴨成肌細(xì)胞分化過程中生肌調(diào)控因子表達(dá)模式
        3.2 鴨pEGFP-N1-Akirin2 載體轉(zhuǎn)染效率
        3.3 過表達(dá)鴨Akirin2 基因?qū)RFs和 MEFs表達(dá)的影響
        3.4 過表達(dá)鴨Akirin2 基因?qū)Τ杉〖?xì)胞細(xì)胞周期的影響
        3.5 過表達(dá)鴨Akirin2 基因?qū)y HC表達(dá)的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第四章 過表達(dá)Akirin2 對鴨成肌細(xì)胞增殖的影響
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料與方法
        2.1 試驗(yàn)動物與試劑
            2.1.1 試驗(yàn)動物
            2.1.2 藥品和試劑
            2.1.3 主要試驗(yàn)儀器
            2.1.4 常用試劑配制
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 總RNA的提取及質(zhì)量檢測
            2.2.2 cDNA的合成
            2.2.3 鴨pEGFP-N1-Akirin2 載體的構(gòu)建
            2.2.4 鴨成肌細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.5 pEGFP-N1-Akirin2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以及雷帕霉素處理成肌細(xì)胞
            2.2.6 成肌細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.2.8 Western Blot
            2.2.9 CCK-8 細(xì)胞增殖活性檢測
        2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 過表達(dá)鴨Akirin2 對成肌細(xì)胞細(xì)胞活性的影響
        3.2 過表達(dá)鴨Akirin2 對周期因子表達(dá)的影響
        3.3 過表達(dá)鴨Akirin2 基因?qū)Φ鞍状x調(diào)控因子表達(dá)的影響
        3.4 雷帕霉素對鴨Akirin2 基因調(diào)控胞內(nèi)蛋白代謝相關(guān)因子表達(dá)的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第五章 miR-365 介導(dǎo)Akirin2 表達(dá)對鴨成肌細(xì)胞增殖的影響
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料與方法
        2.1 試驗(yàn)動物與試劑
            2.1.1 試驗(yàn)動物
            2.1.2 藥品和試劑
            2.1.3 主要試驗(yàn)儀器
            2.1.4 常用試劑配制
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 總RNA的提取及質(zhì)量檢測
            2.2.2 cDNA的合成
            2.2.3 雙熒光素酶報(bào)告載體及其突變載體的構(gòu)建
            2.2.4 鴨成肌細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.2.6 Western Blot
            2.2.7 BrdU免疫熒光染色
        2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 不同物種Akirin23’UTR區(qū)域保守性分析
        3.2 鴨Akirin23’UTR的 microRNA預(yù)測及雙熒光素酶報(bào)告載體構(gòu)建
        3.3 過表達(dá)miR-365 對鴨成肌細(xì)胞增殖活性的影響
        3.4 過表達(dá)miR-365 對胞內(nèi)蛋白代謝相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.5 過表達(dá)miR-365 對周期蛋白相關(guān)調(diào)控因子表達(dá)的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第六章 異源表達(dá)Akirin1 影響鴨成肌細(xì)胞分化的分子機(jī)制
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料與方法
        2.1 試驗(yàn)動物與試劑
            2.1.1 試驗(yàn)動物
            2.1.2 藥品和試劑
            2.1.3 主要試驗(yàn)儀器
            2.1.4 常用試劑配制
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 總RNA的提取及質(zhì)量檢測
            2.2.2 cDNA的合成
            2.2.3 鼠pEGFP-N1-Akirin1 載體構(gòu)建
            2.2.4 鴨成肌細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.5 鴨成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化
            2.2.6 pEGFP-N1-Akirin1與LY294002或SB203580 處理成肌細(xì)胞
            2.2.7 成肌細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.2.9 Western Blot
            2.2.10 細(xì)胞周期測定
            2.2.11 免疫熒光染色
        2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 pEGFP-N1-Akirin1 載體轉(zhuǎn)染效率檢測
        3.2 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)ι≌{(diào)控因子表達(dá)的影響
        3.3 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)38MAPK信號通路相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.4 SB203580 與鼠Akirin1 共處理對p38MAPK/MRF4 相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.5 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)ι≌{(diào)控因子增強(qiáng)子表達(dá)的影響
        3.6 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)GF-II/PI3K/Akt相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.7 LY294002 與鼠Akirin1 共處理對IGF-II/PI3K/Akt相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.8 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)Τ杉?xì)胞周期相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.9 LY294002 與鼠Akirin1 共處理對細(xì)胞周期相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.10 異源表達(dá)鼠Akirin1 基因?qū)Τ杉〖?xì)胞肌管生成的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第七章 總結(jié)
    1 主要結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 下一步需開展的工作
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]不同日齡惠陽胡須雞肌肉中IGF1、MyoD基因表達(dá)研究[J]. 范紅英,陳圓,曾鳳群,李紅偉.  惠州學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(03)
[3]鴨胚骨骼肌成肌細(xì)胞中MyoD1和Myf5基因的表達(dá)與分析[J]. 陶志云,朱春紅,姬改革,徐文娟,單艷菊,李慧芳.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(03)
[4]鵝myf6基因的克隆,胚胎期以及填飼后表達(dá)特征分析[J]. 邵芳,張燕萍,王星果,唐瑞璟,龔道清,顧志良.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2014(02)
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[6]五指山豬不同組織中Myf5與MyoD1基因的表達(dá)研究[J]. 曹婷,侯冠彧,施力光,周漢林,張立嶺.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2012(05)
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博士論文
[1]豬骨骼肌生長及肌纖維類型分布的分子機(jī)理研究[D]. 楊曉靜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]興義鴨MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆與組織時(shí)空表達(dá)研究[D]. 趙忠海.貴州大學(xué) 2016
[2]山羊MEF2基因家族的克隆及其組織表達(dá)規(guī)律的研究[D]. 程波.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]鴨MyoG、MRF4基因的克隆及其在骨骼肌組織中的發(fā)育表達(dá)研究[D]. 賈徑.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]鴨MEF2家族的克隆及組織表達(dá)研究[D]. 司建民.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[5]豬MEF2C和MEF2D基因定位及MEF2C基因的表達(dá)研究[D]. 吳俊紅.浙江大學(xué) 2009
[6]豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及豬MEF2B和MEF2C基因的初步研究[D]. 何波.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3645175