紫花苜蓿（Medicago sativa）在我國西北干旱和半干旱地區(qū)生態(tài)環(huán)境建設和畜牧業(yè)發(fā)展上具有重要的作用,但由于其耐鹽抗旱性較弱在該地區(qū)很難獲得高產。而將優(yōu)良抗逆基因導入紫花苜蓿中以改良其抗逆性,是現(xiàn)階段常用的育種手段。多漿旱生植物霸王（Zygophyllum xanthoxylum）通過吸收生境中的Na⁺并將其區(qū)域化至葉片液泡中來抵御逆境脅迫。本課題組前期克隆了其體內調控Na⁺區(qū)域化的液泡膜Na⁺/H⁺逆向轉運蛋白和為其提供質子驅動力的H⁺-PPase編碼基因ZxNHX1和ZxVP1-1,并將它們共轉化入紫花苜蓿中,T₀和T₁代轉基因紫花苜蓿的耐鹽抗旱性均顯著增強。本研究進一步評估T₂代共表達ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿的抗旱耐鹽性,以期為今后的推廣和應用提供一定的理論依據(jù)。此外,課題組還發(fā)現(xiàn)另一耐氯植物沙芥（Pugionium cornutum）可以吸收大量Cl^-于地上... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 國內外研究進展
    2.1 Na~+/H~+逆向轉運蛋白研究進展
        2.1.1 Na~+/H~+逆向轉運蛋白
        2.1.2 Na~+/H~+逆向轉運蛋白的功能
    2.2 液泡膜H~+-PPase蛋白研究進展
        2.2.1 液泡膜H~+-PPase蛋白
        2.2.2 液泡膜H~+-PPase的功能
    2.3 Cl-通道蛋白研究進展
        2.3.1 Cl~-通道蛋白
        2.3.2 Cl~-通道蛋白的功能
    2.4 紫花苜蓿遺傳轉化研究進展
        2.4.1 基因型的選擇
        2.4.2 外植體的選擇
        2.4.3 農桿菌菌株的選擇
        2.4.4 表達載體的選擇
        2.4.5 轉化方案的選擇
第三章 T_2代共表達ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜�？购的望}性評價
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 處理方法
        3.1.3 測定指標及方法
        3.1.4 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結果與分析
        3.2.1 T_2代轉基因紫花苜蓿具有較強的耐鹽性
        3.2.2 T_2代轉基因紫花苜蓿具有較強的抗旱性
        3.2.3 T_2代轉基因紫花苜蓿的相對生長速率高于野生型
        3.2.4 T_2代轉基因紫花苜蓿維持了較高的保水性能
        3.2.5 T_2代轉基因紫花苜蓿的光合性能優(yōu)于野生型
        3.2.6 T_2代轉基因紫花苜蓿根系活力顯著高于野生型
    3.3 討論
第四章 植物表達載體的構建
    4.1 .材料與方法
        4.1.1 載體與菌株
        4.1.2 酶、抗生素與各類試劑盒
        4.1.3 培養(yǎng)基與抗生素的配制
        4.1.4 引物設計與合成
        4.1.5 擴增片段體系與程序
        4.1.6 擴增片段凝膠電泳與回收
        4.1.7 質粒提取方法
        4.1.8 質粒與PCR產物的酶切連接或In-Fusion連接
        4.1.9 進行大腸桿菌轉化及陽性菌液檢測
        4.1.10 植物表達載體構建圖譜
        4.1.11 對農桿菌EHA105的轉化
    4.2 結果與分析
        4.2.1 Bar基因導入pCAMBIA1302表達載體中
        4.2.2 ZxNHX1-HA導入對照載體中
        4.2.3 將pGmUbi啟動子-目的基因-NOS終止子導入35s::ZxNHX1-HA載體中
    4.3 討論
第五章 紫花苜�？剐灾仓甑墨@得與分子鑒定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 紫花苜蓿植株、農桿菌菌株和植物表達載體
        5.1.2 培養(yǎng)基以及激素等的配制
        5.1.3 農桿菌的活化以及紫花苜蓿遺傳轉化體系的過程
        5.1.4 轉基因植株的分子檢測
    5.2 結果與分析
        5.2.1 紫花苜蓿的遺傳轉化與抗性植株獲得
        5.2.2 轉基因植株的檢測
    5.3 討論
第六章 結論
參考文獻
在學期間的研究成果
致謝



本文編號：3638382