利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系,將Cry1Ac/Ab融合抗蟲基因表達(dá)載體導(dǎo)入栽培大豆品種GP03-8-23中,通過(guò)Cry1Ac/Ab融合基因在大豆中的表達(dá),獲得了抗蟲轉(zhuǎn)基因大豆新材料。試驗(yàn)共轉(zhuǎn)化子葉節(jié)外植體1 540個(gè),再生轉(zhuǎn)化苗經(jīng)PCR、Southern雜交和Bar試紙條檢測(cè),獲得85株陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株,平均轉(zhuǎn)化率為5.47%。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（qRT-PCR）檢測(cè)了目標(biāo)基因在轉(zhuǎn)基因大豆不同株系及不同組織中的表達(dá)量。結(jié)果表明:不同轉(zhuǎn)基因株系表達(dá)量存在顯著差異,目標(biāo)基因在大豆根、莖、葉、子粒中均有表達(dá),在葉中的表達(dá)量最高,根中的表達(dá)量較高,莖和子粒中的表達(dá)量最低。經(jīng)室內(nèi)抗食葉性害蟲離體鑒定,獲得抗蟲性較好的T1代轉(zhuǎn)Cry1Ac/Ab基因大豆材料,其中1份表現(xiàn)為高抗,抗蟲性顯著優(yōu)于對(duì)照,可為培育抗蟲大豆新品系提供新的種質(zhì)材料。 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,39(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 植物材料
        1.1.2 基因及載體
        1.1.3 檢測(cè)引物
    1.2 方法
        1.2.1 植物表達(dá)載體p B7RWG-Cry1Ac/Ab在大豆中的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.2.2 轉(zhuǎn)化植株的分子生物學(xué)檢測(cè)
    1.3 轉(zhuǎn)基因大豆抗食葉性害蟲的離體鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)Cry1Ac/Ab融合基因大豆植株
    2.2 轉(zhuǎn)化植株的分子生物學(xué)檢測(cè)
    2.3 轉(zhuǎn)基因植株的Southern blot檢測(cè)
    2.4 T1代轉(zhuǎn)Cry1Ac/Ab融合基因大豆目標(biāo)基因相對(duì)表達(dá)情況的分析
    2.5 轉(zhuǎn)基因植株抗食葉性害蟲的離體鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的RNAiCP基因在大豆中的轉(zhuǎn)化[J]. 章潔瓊,李紅艷,胡小南,單志慧,唐桂香.  作物學(xué)報(bào). 2013(09)
[2]外源DNA直接導(dǎo)入技術(shù)及在大豆育種中的應(yīng)用[J]. 任海紅,任小俊,王英,劉學(xué)義.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(05)
[3]Screening Chinese soybean genotypes for Agrobacterium-mediated genetic transformation suitability[J]. Zhang-yue SONG,Jing-luan TIAN,Wei-zhe FU,Lin LI,Ling-hong LU,Lian ZHOU,Zhi-hui SHAN,Gui-xiang TANG,Hui-xia SHOU.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2013(04)
[4]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆轉(zhuǎn)Bt-cryIA抗蟲基因[J]. 藍(lán)嵐,吳帥,申麗威,王志坤,孟凡立,宋波,拓云,劉珊珊.  中國(guó)油料作物學(xué)報(bào). 2013(01)
[5]cry2Aa9m抗蟲基因植物表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)大豆的遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 朱延明,郜庭,張鳳,柏錫,才華,紀(jì)巍,羅曉.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[6]不同轉(zhuǎn)化方法獲得的轉(zhuǎn)基因棉花外源基因拷貝數(shù)分析[J]. 楊曉杰,劉傳亮,張朝軍,武芝霞,張雪妍,劉坤,房衛(wèi)平,李付廣.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2011(02)
[7]cry1Ia1基因轉(zhuǎn)化大豆及抗蟲性的初步評(píng)價(jià)[J]. 武小霞,李靜,王志坤,劉珊珊,李海燕,武天龍,李文濱.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2010(05)
[8]實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 陳旭,齊鳳坤,康立功,李景富.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(08)
[9]利用花粉管通道法將抗蟲基因（cryV）轉(zhuǎn)入大豆的研究[J]. 武小霞,劉偉婷,劉琦,李靜,馬永,李文濱.  大豆科學(xué). 2010(04)
[10]轉(zhuǎn)cry 1Iem基因大豆的培育及抗蟲性檢測(cè)[J]. 陳秀華,柏錫,潘欣,翟紅,才華,紀(jì)巍,李勇,朱延明.  大豆科學(xué). 2009(06)



本文編號(hào)：3634406