目的:1.通過生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測靶向Sp110的microRNA（miRNA）。2.通過在THP-1細胞中檢測miRNA本底水平進一步篩選miRNA。3.應(yīng)用雙熒光素酶實驗驗證miR-6857-3p和Sp110存在靶向關(guān)系。4.應(yīng)用實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)研究miR-6857-3p對Sp110的調(diào)控作用。5.研究miR-6857-3p對卡介苗感染的巨噬細胞凋亡的影響。方法:1.用生物信息學(xué)網(wǎng)站（TargetScan、miRDB和miRTarBase）預(yù)測可能和Sp110具有靶向關(guān)系的miRNA（miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696）。2.提取人巨噬細胞（THP-1細胞）中的總RNA,將miRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,應(yīng)用qPCR技術(shù)檢測先前預(yù)測的5種miRNA的本底表達水平,采用2^-△ct法計算相對表達量,篩選表達量最高的3種miRNA（miR-6857-3p、miR-4659-5p和miR-4772-3p）進行雙熒光素酶實驗。3.從數(shù)據(jù)庫中獲取miR-6857-3p、miR-4659... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Sp110基因的研究進展Figure1ResearchprogressofSp110gene

miR-6857-3p對人巨噬細胞Sp110基因調(diào)控的功能學(xué)研究3圖2Mtb感染巨噬細胞后miRNA及Sp110部分作用機制圖Figure2PartialmechanismofmiRNAandSp110afterMtbinfectionofmacrophages5.miR-6857-3p和Sp110基因的研究我們發(fā)現(xiàn)很多miRNA的異常表達都可能調(diào)控基因的表達，并在結(jié)核病的產(chǎn)生、發(fā)展及宿主細胞抗結(jié)核反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。我們通過mirbase、TargetScan等數(shù)據(jù)庫預(yù)測出可能靶向Sp110基因的miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696，之后實驗研究發(fā)現(xiàn)，THP-1細胞株中miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-6857-3p的本底表達水平較高，并且miR-6857-3p的表達水平最高，目前miR-6857-3p和Sp110基因是否存在靶向調(diào)控關(guān)系尚未見報道。因此，本實驗我們通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-6857-3p和Sp110之間是否存在靶向關(guān)系，并且通過將化學(xué)合成的小分子miRNAmimic及inhibitor導(dǎo)入THP-1細胞，應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)，研究miR-6857-3p對Sp110基因的調(diào)控作用，這可能為將來針對結(jié)核病的潛在治療干預(yù)提供有用的信息。

miR-6857-3p對人巨噬細胞Sp110基因調(diào)控的功能學(xué)研究163.結(jié)果3.1預(yù)測靶向Sp110的miRNA為了預(yù)測靶向Sp110基因的miRNA，我們使用了TargetScan、miRDB和miRTarBase預(yù)測網(wǎng)站進行聯(lián)合分析（見圖3）。由于三個網(wǎng)站交集數(shù)量較少，并且不同數(shù)據(jù)庫使用的算法及收錄的miRNA不同，各數(shù)據(jù)庫之間的預(yù)測結(jié)果具有很大差異，因此我們篩選至少在兩個網(wǎng)站中都預(yù)測的miRNA，通過兩者間種子區(qū)域匹配方式及在miRTarBase數(shù)據(jù)庫中是否已進行驗證，我們最終認為miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696可能靶向作用于Sp110基因。并且在TargetScan數(shù)據(jù)庫中分別找出其與Sp110基因的結(jié)合位點（見圖4）。其中miR-4659-5p、miR-4772-3p和miR-19a-5p在miRTarBase網(wǎng)站中顯示已通過NGS測序技術(shù)進行驗證（見圖5），但證據(jù)不夠充分，因此還需進一步實驗進行驗證。圖33個預(yù)測數(shù)據(jù)庫聯(lián)合韋恩圖Figure3JointWaynediagramofthreepredictiondatabases圖4預(yù)測的5個miRNA與Sp110基因的結(jié)合位點Figure4PredictedbindingsitesofthefivemiRNAstotheSp110gene

【參考文獻】：
期刊論文
[1]新疆地區(qū)2006—2016年肺結(jié)核報告發(fā)病和死亡情況分析[J]. 趙珍,陳鵬,依帕爾·艾海提,劉年強.  中國公共衛(wèi)生. 2018(11)



本文編號：3621292