黃瓜（Cucumis sativus L.）是我國(guó)重要的設(shè)施栽培蔬菜,干旱導(dǎo)致其生長(zhǎng)發(fā)育延遲,產(chǎn)量嚴(yán)重下降,果實(shí)品質(zhì)變差。遺傳轉(zhuǎn)化驗(yàn)證作為當(dāng)今研究基因功能、現(xiàn)代分子育種的重要方法,建立一套穩(wěn)定的黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系可為運(yùn)用過(guò)量表達(dá)等技術(shù)進(jìn)行黃瓜功能基因組學(xué)研究提供技術(shù)支撐。本研究以黃瓜PIP2;4基因?yàn)檠芯繉?duì)象,克隆了PIP2;4基因并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析和遺傳轉(zhuǎn)化研究,主要結(jié)果如下:（1）生物信息學(xué)表明,CsPIP2;4長(zhǎng)852 bp,編碼283個(gè)氨基酸,CsPIP2;4蛋白具有疏水性、無(wú)信號(hào)肽段、有跨膜結(jié)構(gòu),是定位在質(zhì)膜的內(nèi)在蛋白,以無(wú)規(guī)則卷曲和α-螺旋結(jié)構(gòu)為主,具有典型的水通道蛋白結(jié)構(gòu)功能域,屬于MIP超家族;蛋白質(zhì)同源比顯示,CsPIP2;4與甜瓜PIP2;7的親緣關(guān)系最近。q PCR結(jié)果表明CsPIP2;4表達(dá)受干旱誘導(dǎo),可能參與干旱脅迫的調(diào)控。（2）構(gòu)建了由Ca MV 35S啟動(dòng)子調(diào)控的表達(dá)載體p CAMBIA 2300s-PIP2;4;對(duì)黃瓜‘9930’不定芽和根誘導(dǎo)進(jìn)行選擇壓的篩選,最佳篩選濃度為150 mg/L Kan,而‘新泰密刺’生根培養(yǎng)基的最佳濃度為100 mg/L... 

【文章來(lái)源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

黃瓜總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖

192.2.2目的片段克隆依據(jù)黃瓜基因組數(shù)據(jù)庫(kù)查詢得到黃瓜PIP2;4基因編碼區(qū)序列，設(shè)計(jì)引物。以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得目的片段PIP2;4，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳(圖2.2)，目的條帶的大小與估計(jì)的片段大小符合852bp。圖2.2PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：擴(kuò)增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大腸桿菌PCR鑒定陽(yáng)性單克隆圖2.3菌液PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液擴(kuò)增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表達(dá)載體與目的基因的檢驗(yàn)測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中在線進(jìn)行Blast。黃瓜PIP2;4基因全長(zhǎng)核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列，用DNAMAN進(jìn)行黃瓜PIP2;4基因序列比對(duì)，目的基因全長(zhǎng)852bp。結(jié)果（圖2.4）表明所得片段為黃瓜PIP2;4基因序列。

192.2.2目的片段克隆依據(jù)黃瓜基因組數(shù)據(jù)庫(kù)查詢得到黃瓜PIP2;4基因編碼區(qū)序列，設(shè)計(jì)引物。以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得目的片段PIP2;4，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳(圖2.2)，目的條帶的大小與估計(jì)的片段大小符合852bp。圖2.2PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：擴(kuò)增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大腸桿菌PCR鑒定陽(yáng)性單克隆圖2.3菌液PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液擴(kuò)增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表達(dá)載體與目的基因的檢驗(yàn)測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中在線進(jìn)行Blast。黃瓜PIP2;4基因全長(zhǎng)核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列，用DNAMAN進(jìn)行黃瓜PIP2;4基因序列比對(duì)，目的基因全長(zhǎng)852bp。結(jié)果（圖2.4）表明所得片段為黃瓜PIP2;4基因序列。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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[7]干旱脅迫及復(fù)水對(duì)豌豆根系生長(zhǎng)及內(nèi)源激素含量的影響[D]. 軒春香.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[8]水分脅迫對(duì)釀酒葡萄黑比諾幼苗生理生化特性的影響[D]. 何衛(wèi)軍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[9]調(diào)虧灌溉對(duì)溫室黃瓜（Cucumis sativus L.）生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量品質(zhì)的影響[D]. 常莉飛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
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本文編號(hào)：3620213