黃瓜（Cucumis sativus L.）是我國重要的設施栽培蔬菜,干旱導致其生長發(fā)育延遲,產(chǎn)量嚴重下降,果實品質變差。遺傳轉化驗證作為當今研究基因功能、現(xiàn)代分子育種的重要方法,建立一套穩(wěn)定的黃瓜遺傳轉化體系可為運用過量表達等技術進行黃瓜功能基因組學研究提供技術支撐。本研究以黃瓜PIP2;4基因為研究對象,克隆了PIP2;4基因并進行了生物信息學分析和遺傳轉化研究,主要結果如下:（1）生物信息學表明,CsPIP2;4長852 bp,編碼283個氨基酸,CsPIP2;4蛋白具有疏水性、無信號肽段、有跨膜結構,是定位在質膜的內在蛋白,以無規(guī)則卷曲和α-螺旋結構為主,具有典型的水通道蛋白結構功能域,屬于MIP超家族;蛋白質同源比顯示,CsPIP2;4與甜瓜PIP2;7的親緣關系最近。q PCR結果表明CsPIP2;4表達受干旱誘導,可能參與干旱脅迫的調控。（2）構建了由Ca MV 35S啟動子調控的表達載體p CAMBIA 2300s-PIP2;4;對黃瓜‘9930’不定芽和根誘導進行選擇壓的篩選,最佳篩選濃度為150 mg/L Kan,而‘新泰密刺’生根培養(yǎng)基的最佳濃度為100 mg/L... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學浙江省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

黃瓜總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖

192.2.2目的片段克隆依據(jù)黃瓜基因組數(shù)據(jù)庫查詢得到黃瓜PIP2;4基因編碼區(qū)序列，設計引物。以cDNA為模板，進行PCR擴增，獲得目的片段PIP2;4，將PCR產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳(圖2.2)，目的條帶的大小與估計的片段大小符合852bp。圖2.2PCR擴增產(chǎn)物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：擴增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大腸桿菌PCR鑒定陽性單克隆圖2.3菌液PCR擴增產(chǎn)物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液擴增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表達載體與目的基因的檢驗測序結果在GenBank數(shù)據(jù)庫中在線進行Blast。黃瓜PIP2;4基因全長核苷酸序列及其推導的氨基酸序列，用DNAMAN進行黃瓜PIP2;4基因序列比對，目的基因全長852bp。結果（圖2.4）表明所得片段為黃瓜PIP2;4基因序列。

192.2.2目的片段克隆依據(jù)黃瓜基因組數(shù)據(jù)庫查詢得到黃瓜PIP2;4基因編碼區(qū)序列，設計引物。以cDNA為模板，進行PCR擴增，獲得目的片段PIP2;4，將PCR產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳(圖2.2)，目的條帶的大小與估計的片段大小符合852bp。圖2.2PCR擴增產(chǎn)物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：擴增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大腸桿菌PCR鑒定陽性單克隆圖2.3菌液PCR擴增產(chǎn)物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液擴增產(chǎn)物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表達載體與目的基因的檢驗測序結果在GenBank數(shù)據(jù)庫中在線進行Blast。黃瓜PIP2;4基因全長核苷酸序列及其推導的氨基酸序列，用DNAMAN進行黃瓜PIP2;4基因序列比對，目的基因全長852bp。結果（圖2.4）表明所得片段為黃瓜PIP2;4基因序列。

【參考文獻】：
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本文編號：3620213