共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid,CLA）通常是指含有順式或反式共軛雙鍵的一系列構型和位置異構的亞油酸的總稱。CLA具有豐富的營養(yǎng)價值,不同的異構體也具有不同的生理功能,如c9,t11-CLA具有抑癌作用,而t10,c12-CLA則能夠預防糖尿病和減肥。本研究以從黃牛瘤胃中篩選到的四株具有亞油酸異構酶活性的乳酸菌為出發(fā)菌株,通過PCR擴增得到LAI基因后,構建了四株原核工程菌,并利用PCR-RFLP技術對得到的LAI基因進行多態(tài)性分析。實驗結果如下:1.亞油酸異構酶原核工程菌的構建及表達:本實驗室從黃牛瘤胃中分離得到四株具有將LA轉化為CLA能力的乳酸菌,通過PCR技術擴增得到LAI基因,PCR產物克隆到pUCm-T質粒中,得到重組質粒（pUCm-T-LAI）,經(jīng)PCR鑒定、酶切分析和克隆測序鑒定克隆成功后,亞克隆至表達載體pET-DsbA中,構建重組表達載體（pET-DsbA-LAI）并轉化到E.coli DH5α中,經(jīng)PCR鑒定與酶切分析證明重組表達載體（pET-DsbA-LAI）構建成功后,轉化到E.coli BL21中進行誘導表達,SDS-PAGE電... 

【文章來源】：南昌大學江西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CLl4的空間結構

而 乳 球 乳 桿 菌 乳 亞 種 (Lactobacillus lactis subsp. lactis I11403)(GeneID:1114586) 和 詹 士 乳 桿 菌 (Lactobacillus johnsonii NCC533)(GeneID:2743639)與其的同源性也分別達到 63%和 70%。值得研究的是，嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus NCFM)基因組和羅伊氏乳桿菌的比對結果發(fā)現(xiàn)其基因組上含有兩段與羅伊氏乳桿菌同源性較高的片段，而且這兩段序列在基因組上的位置還比較相近，分別為 542229-544001 bp和 634809 -636584 bp。嗜酸乳桿菌雖然已經(jīng)被證實具有 c9,t11-催化活性，但是關于這兩段序列是如何進行誘導表達，而其表達的產物的在反應中的具體作用還需要再進行研究。采 用 Bioediter 7.0 軟 件 對 加 氏 乳 桿 菌 (Lactobacillusgasseri)(GeneID:28877223)、嗜酸乳桿菌、Lactobacillus reuteri 及詹士乳桿菌的亞油酸異構酶的氨基酸序列的疏水性進行分析，實驗發(fā)現(xiàn)，這四種乳桿菌的疏水性圖譜存在高度相似性(圖 1.2)。因此可以推斷這四種乳桿菌的同源序列的空間結構可能也存在高度相似，也就是說其對應的蛋白質的結構和性質也高度相似。

第 1 章 引言物乳桿菌 WCFS1 的全基因組與羅伊氏乳桿菌的亞油酸異構酶序列進行比對分析后發(fā)現(xiàn)，其基因組上含有一段與后者同源性為 32%的氨基酸序列，該氨基酸編碼序列全長為 1710 bp，可以編碼 569 個氨基酸。植物乳桿菌和羅伊氏乳桿菌雖然都屬于乳酸桿菌屬，但是這兩者在親緣關系上并不相近，這可能便是導致植物乳桿菌中的亞油酸異構酶基因序列和其他幾株乳酸桿菌的同源性不高的原因。然而采用 Bioediter 7.0 軟件對植物乳桿菌的亞油酸異構酶的氨基酸序列和羅伊氏乳桿菌進行疏水性分析后發(fā)現(xiàn)，它們的疏水性圖譜仍存在較高的相似性(圖 1.3)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Morphological and AFLP-Based Genetic Diversity in Rosa platyacantha Population in Eastern Tianshan Mountains of Northwestern China[J]. YANG Shuhua,GUO Ning,GE Hong.  Horticultural Plant Journal. 2016(01)
[2]不飽和脂肪酸在瘤胃氫化的微生物學機制研究進展[J]. 姜雅慧,卜登攀,楊紅建,王之盛.  華北農學報. 2015(S1)
[3]酸奶中乳酸菌穩(wěn)定性的研究[J]. 林瑩,代道芳,王旭清,張超.  中國釀造. 2011(04)
[4]人胰高血糖素樣肽-1突變體融合蛋白在大腸桿菌中的自誘導表達優(yōu)化[J]. 顧娟,勞勛,金明飛,黃靜,吳自榮.  微生物學通報. 2010(05)
[5]共軛亞油酸生理功能及其合成方法[J]. 王瑾,徐春濤.  食品工程. 2009(03)
[6]共軛亞油酸的生理學功能及健康意義[J]. 劉佩,沈生榮,阮暉,何國慶.  中國糧油學報. 2009(06)
[7]重組大腸桿菌BL21（DE3）-pET28a（+）-bgl誘導表達β-葡聚糖酶的條件優(yōu)化[J]. 李永仙,鄭飛云,李崎,顧國賢.  食品與生物技術學報. 2009(02)
[8]共軛亞油酸對癌的抗性及機制探索[J]. 董貴成,曹麗霞,那日蘇,照日格圖,李少英,博·格日勒圖.  食品科學. 2008(04)
[9]共軛亞油酸的來源及其生物學作用[J]. 王麗芳,盧德勛,馬燕芬.  乳業(yè)科學與技術. 2008(02)
[10]共軛亞油酸的生理功能[J]. 馮有勝.  重慶工商大學學報(自然科學版). 2007(04)



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