共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid,CLA）通常是指含有順式或反式共軛雙鍵的一系列構(gòu)型和位置異構(gòu)的亞油酸的總稱。CLA具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,不同的異構(gòu)體也具有不同的生理功能,如c9,t11-CLA具有抑癌作用,而t10,c12-CLA則能夠預(yù)防糖尿病和減肥。本研究以從黃牛瘤胃中篩選到的四株具有亞油酸異構(gòu)酶活性的乳酸菌為出發(fā)菌株,通過(guò)PCR擴(kuò)增得到LAI基因后,構(gòu)建了四株原核工程菌,并利用PCR-RFLP技術(shù)對(duì)得到的LAI基因進(jìn)行多態(tài)性分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.亞油酸異構(gòu)酶原核工程菌的構(gòu)建及表達(dá):本實(shí)驗(yàn)室從黃牛瘤胃中分離得到四株具有將LA轉(zhuǎn)化為CLA能力的乳酸菌,通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增得到LAI基因,PCR產(chǎn)物克隆到pUCm-T質(zhì)粒中,得到重組質(zhì)粒（pUCm-T-LAI）,經(jīng)PCR鑒定、酶切分析和克隆測(cè)序鑒定克隆成功后,亞克隆至表達(dá)載體pET-DsbA中,構(gòu)建重組表達(dá)載體（pET-DsbA-LAI）并轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α中,經(jīng)PCR鑒定與酶切分析證明重組表達(dá)載體（pET-DsbA-LAI）構(gòu)建成功后,轉(zhuǎn)化到E.coli BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE電... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CLl4的空間結(jié)構(gòu)

而 乳 球 乳 桿 菌 乳 亞 種 (Lactobacillus lactis subsp. lactis I11403)(GeneID:1114586) 和 詹 士 乳 桿 菌 (Lactobacillus johnsonii NCC533)(GeneID:2743639)與其的同源性也分別達(dá)到 63%和 70%。值得研究的是，嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus NCFM)基因組和羅伊氏乳桿菌的比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其基因組上含有兩段與羅伊氏乳桿菌同源性較高的片段，而且這兩段序列在基因組上的位置還比較相近，分別為 542229-544001 bp和 634809 -636584 bp。嗜酸乳桿菌雖然已經(jīng)被證實(shí)具有 c9,t11-催化活性，但是關(guān)于這兩段序列是如何進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，而其表達(dá)的產(chǎn)物的在反應(yīng)中的具體作用還需要再進(jìn)行研究。采 用 Bioediter 7.0 軟 件 對(duì) 加 氏 乳 桿 菌 (Lactobacillusgasseri)(GeneID:28877223)、嗜酸乳桿菌、Lactobacillus reuteri 及詹士乳桿菌的亞油酸異構(gòu)酶的氨基酸序列的疏水性進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這四種乳桿菌的疏水性圖譜存在高度相似性(圖 1.2)。因此可以推斷這四種乳桿菌的同源序列的空間結(jié)構(gòu)可能也存在高度相似，也就是說(shuō)其對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)也高度相似。

第 1 章 引言物乳桿菌 WCFS1 的全基因組與羅伊氏乳桿菌的亞油酸異構(gòu)酶序列進(jìn)行比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，其基因組上含有一段與后者同源性為 32%的氨基酸序列，該氨基酸編碼序列全長(zhǎng)為 1710 bp，可以編碼 569 個(gè)氨基酸。植物乳桿菌和羅伊氏乳桿菌雖然都屬于乳酸桿菌屬，但是這兩者在親緣關(guān)系上并不相近，這可能便是導(dǎo)致植物乳桿菌中的亞油酸異構(gòu)酶基因序列和其他幾株乳酸桿菌的同源性不高的原因。然而采用 Bioediter 7.0 軟件對(duì)植物乳桿菌的亞油酸異構(gòu)酶的氨基酸序列和羅伊氏乳桿菌進(jìn)行疏水性分析后發(fā)現(xiàn)，它們的疏水性圖譜仍存在較高的相似性(圖 1.3)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Morphological and AFLP-Based Genetic Diversity in Rosa platyacantha Population in Eastern Tianshan Mountains of Northwestern China[J]. YANG Shuhua,GUO Ning,GE Hong.  Horticultural Plant Journal. 2016(01)
[2]不飽和脂肪酸在瘤胃氫化的微生物學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 姜雅慧,卜登攀,楊紅建,王之盛.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2015(S1)
[3]酸奶中乳酸菌穩(wěn)定性的研究[J]. 林瑩,代道芳,王旭清,張超.  中國(guó)釀造. 2011(04)
[4]人胰高血糖素樣肽-1突變體融合蛋白在大腸桿菌中的自誘導(dǎo)表達(dá)優(yōu)化[J]. 顧娟,勞勛,金明飛,黃靜,吳自榮.  微生物學(xué)通報(bào). 2010(05)
[5]共軛亞油酸生理功能及其合成方法[J]. 王瑾,徐春濤.  食品工程. 2009(03)
[6]共軛亞油酸的生理學(xué)功能及健康意義[J]. 劉佩,沈生榮,阮暉,何國(guó)慶.  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2009(06)
[7]重組大腸桿菌BL21（DE3）-pET28a（+）-bgl誘導(dǎo)表達(dá)β-葡聚糖酶的條件優(yōu)化[J]. 李永仙,鄭飛云,李崎,顧國(guó)賢.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2009(02)
[8]共軛亞油酸對(duì)癌的抗性及機(jī)制探索[J]. 董貴成,曹麗霞,那日蘇,照日格圖,李少英,博·格日勒?qǐng)D.  食品科學(xué). 2008(04)
[9]共軛亞油酸的來(lái)源及其生物學(xué)作用[J]. 王麗芳,盧德勛,馬燕芬.  乳業(yè)科學(xué)與技術(shù). 2008(02)
[10]共軛亞油酸的生理功能[J]. 馮有勝.  重慶工商大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(04)



本文編號(hào)：3619948