目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌（Mtb）Rv1988基因原核表達載體pET30b-Rv1988,誘導(dǎo)目的蛋白的表達并進行純化,通過體外試驗和動物試驗觀察rRv1988誘導(dǎo)人淋巴細(xì)胞及小鼠的免疫應(yīng)答類型及水平。方法設(shè)計目的基因Rv1988特異性引物,PCR擴增Rv1988基因,將克隆片段與質(zhì)粒pET30b進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30b-Rv1988,以基因工程技術(shù)表達并純化目的蛋白rRv1988。從山西省長治醫(yī)學(xué)院和平醫(yī)院感染科募集26例符合要求的受試者,采用全血IFN-γ分析試驗（WBIA）檢測Rv1988抗原誘導(dǎo)Mtb感染者和健康對照者外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ水平及其差異。其中動物試驗設(shè)5個組（PBS組、BCG組、DMT組、rRv1988/DMT組及BCG+rRv1988/DMT組）,皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后處死并檢測特異性抗體滴度,脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th1型細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并進行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果成功構(gòu)建了Rv1988基因重組載體,表達并純化了重組蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ濃度顯著高于健康對... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

pET30b-Rv1988的構(gòu)建、表達及鑒定

共篩選出Mtb感染者26例,其中活動期TB患者(ATB)13例、潛伏感染者(LTBI)13例,健康對照者(Healthy controls, HCs)9例,IFN-γ水平檢測結(jié)果見圖2A、2B。非特異性刺激物PHA刺激Mtb感染者和健康對照者產(chǎn)生的IFN-γ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);rEC和rRv1988蛋白刺激Mtb感染者產(chǎn)生的IFN-γ水平與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=11.47、7.972和10.21、6.831, 均P<0.01),兩蛋白刺激ATB人群產(chǎn)生的IFN-γ水平均顯著高于LTBI人群(t=3.939和2.67, 均P<0.05)。3 小鼠血清中抗原特異性抗體水平

經(jīng)間接ELISA法檢測小鼠血清特異性IgG、IgG1及IgG2a水平,結(jié)果見圖3。與DMT組相比三免疫組上述抗體水平均升高,其中BCG+rRv1988/DMT組抗體滴度最高,其次為rRv1988/DMT組,BCG組較低(F=755.1、326.5和193.1, 均P<0.01)。BCG+rRv1988/DMT組和rRv1988/DMT組的IgG2a∶IgG1比值顯著高于BCG組(IgG2a∶IgG1>1)(F=12.5, P<0.05)。顯示rRv1988以誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答類型為主。4 Rv1988刺激小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]結(jié)核分支桿菌RD區(qū)在結(jié)核病診斷及疫苗中的研究進展[J]. 羅微.  中華傳染病雜志. 2017 (11)
[3]結(jié)核分枝桿菌比較基因組學(xué)研究進展[J]. 池水晶,寶福凱,柳愛華.  科技通報. 2013(09)



本文編號：3619596