松材線蟲�。≒ine wilt disease）是由松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）引起的毀滅性的松屬植物流行性病害。松材線蟲病常年在我國(guó)多個(gè)省市發(fā)生,造成嚴(yán)重?fù)p失。近來研究發(fā)現(xiàn)松材線蟲作為外來入侵物種其入侵性與其繁殖率有密切聯(lián)系,且種群性比是影響繁殖率的重要因素,但目前對(duì)于松材線蟲性別決定和分化機(jī)制尚不清楚。另一方面,松材線蟲dauer幼蟲階段具有較強(qiáng)適應(yīng)不良環(huán)境的能力,且dauer幼蟲能借由天牛的取食活動(dòng)進(jìn)行擴(kuò)散,但對(duì)于松材線蟲dauer幼蟲的形成機(jī)制尚未明確。深入研究松材線蟲性別決定和dauer幼蟲形成機(jī)制問題有利于發(fā)展新的松材線蟲病防控策略。本研究本研究參考秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）性別決定基因fem-1和fem-2,以及與dauer幼蟲形成基因daf-12,克隆松材線蟲中同源基因�？寺～@得松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854片段后,采用實(shí)時(shí)定量PCR、原位雜交、RNA干擾等技術(shù),探究其時(shí)空動(dòng)態(tài)表達(dá)特性和調(diào)控功能。具體研究結(jié)果如下:一、實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明,Bxy012009和Bx... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

秀麗隱桿線蟲性別決定信號(hào)通路[51]

1文獻(xiàn)綜述9圖1.4dauer形成調(diào)控模型[70]Figure1.4AmodelfortheregulatoryplasticityofdauerformationTGF-β途徑是調(diào)節(jié)dauer形成的主要內(nèi)分泌途徑之一[75]。通過遺傳分組，daf-1和daf-4，daf-7，daf-8和daf-14突變體（均為Daf-c）都可以被daf-3和daf-5（均為Daf-d）有效抑制[76]。這些Daf-c基因型還顯示出對(duì)取食和覓食的影響，增加脂肪沉積和卵子滯留。這些基因確定了TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的核心成分：daf-7基因編碼TGF-β，daf-1和daf-4分別編碼I型和II型TGF-β受體[77-78]。daf-3，daf-8和daf-14編碼SMAD，是該途徑的核效應(yīng)子[79-80]。最后，daf-5編碼轉(zhuǎn)錄因子SNO/SKI，與SMAD相互作用[81]。daf-7/TGF-β僅在ASI神經(jīng)感覺細(xì)胞中表達(dá)，而下游受體和轉(zhuǎn)錄因子則廣泛表達(dá)[82-83]。正如遺傳學(xué)所預(yù)測(cè)的那樣，daf-7/TGF-β在神經(jīng)細(xì)胞中特異表達(dá)，其表達(dá)受到食物的正向調(diào)節(jié)，并受到dauer信息素和高溫的抑制[82,84]。在有利的條件下，高水平分泌的daf-7/TGF-β結(jié)合并激活靶組織中的DAF-1/4受體激酶。這些受體被認(rèn)為會(huì)磷酸化daf-8和daf-14編碼的SMAD，從而導(dǎo)致其活化，從而抑制和daf-5/SNOSKI形成復(fù)合物，并促進(jìn)能量代謝和生殖生長(zhǎng)。在不利的條件下，減少daf-7/TGF-β的表達(dá)，daf-5/SNOSK與daf-3/SMAD形成復(fù)合體，抑制daf-9基因的表達(dá)，使得線蟲進(jìn)入dauer期[85-86]。且有研究表

松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854表達(dá)特性與功能分析263結(jié)果與分析3.1松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854基因生物信息學(xué)分析3.1.1松材線蟲Bxy012009基因生物信息學(xué)分析以松材線蟲cDNA為模板，用特異性引物PCR擴(kuò)增后得到一條約856bp的Bxy012009基因片段。利用NCBI的ORFfinder進(jìn)行開放閱讀框搜索，發(fā)現(xiàn)Bxy012009包含一個(gè)681bp的完整ORF，編碼226個(gè)氨基酸，且對(duì)序列進(jìn)行分析顯示與fem-1基因高度同源。通過蛋白質(zhì)序列理化參數(shù)計(jì)算軟件ExPASyProtParamtool獲得了fem-1基因蛋白的分子式為：C1100H1756N296O351S14，分子量為25.19kDa，全長(zhǎng)蛋白的理論等電點(diǎn)pI值為4.8。推測(cè)其體外半衰期為30h，不穩(wěn)定指數(shù)（II）為26.14，是一類較穩(wěn)定的蛋白。TMHMM預(yù)測(cè)結(jié)果顯示該蛋白不含有跨膜結(jié)構(gòu)域；SignalP3.0Server預(yù)測(cè)結(jié)果顯示該蛋白不具有N端的信號(hào)肽序列，表明蛋白可能定位在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)或細(xì)胞器。利用DNAMAN多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，Bxy012009編碼的蛋白與多個(gè)物種的錨蛋白重復(fù)序列具有較高一致性（如圖3.1A），表明該蛋白屬于含有ANK重復(fù)序列的一類蛋白。利用MEGA7對(duì)不同物種的fem-1蛋白序列做系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果顯示，松材線蟲Bxy012009與秀麗隱桿線蟲位于同一分支，并與其它物種區(qū)分開來（圖3.1B）。注：A蛋白序列比對(duì)；B進(jìn)化分析圖3.1Bxy012009基因序列比對(duì)與發(fā)育進(jìn)化分析Figure3.1SequencealignmentandphylogeneticanalysisofBxy012009

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]松材線蟲病發(fā)生及防控現(xiàn)狀[J]. 王曦茁,曹業(yè)凡,汪來發(fā),樸春根,李成錄.  環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]營(yíng)養(yǎng)和蒎烯脅迫條件下松材線蟲雌雄比變化規(guī)律[J]. 王璇,理永霞,張星耀.  林業(yè)科學(xué). 2017(08)
[3]樹棲真菌對(duì)擴(kuò)散型松材線蟲生活史的影響[J]. 呂全,劉慧敏,曾凡勇,陳衛(wèi)平,李成喜,張星耀.  植物病理學(xué)報(bào). 2015(02)
[4]松墨天牛攜帶松材線蟲傳播的化學(xué)生態(tài)學(xué)機(jī)制[J]. 鄭雅楠,楊忠岐,王小藝.  植物保護(hù). 2014(01)
[5]東亞飛蝗fem-1基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 時(shí)紅,郝友進(jìn),陳斌,司鳳玲,王鵬,何正波.  昆蟲學(xué)報(bào). 2013(07)
[6]松材線蟲病病原學(xué)研究的幾個(gè)問題[J]. 葉建仁,黃麟.  中國(guó)森林病蟲. 2012(05)
[7]松材線蟲及其關(guān)鍵傳媒墨天牛的研究進(jìn)展[J]. 寧眺,方宇凌,湯堅(jiān),孫江華.  昆蟲知識(shí). 2004(02)
[8]松材線蟲個(gè)體發(fā)育研究[J]. 葉為民,馮志新.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1993(02)



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