本研究旨在構(gòu)建Zbtb38（zinc finger and BTB domain containing 38）基因慢病毒過表達(dá)質(zhì)粒載體。以小鼠脊髓組織為材料,采用重疊延伸PCR方法擴(kuò)增小鼠Zbtb38基因的CDS序列,分別設(shè)計(jì)Zbtb38 CDS序列前段擴(kuò)增引物1和后段擴(kuò)增引物2,再以上述兩對引物的擴(kuò)增產(chǎn)物作為模板,設(shè)計(jì)引物3并進(jìn)行融合PCR擴(kuò)增,由此得到Zbtb38 CDS全序列。將獲得的Zbtb38基因CDS全序列連接到質(zhì)粒pGM-T,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,采用直接PCR鑒定陽性克隆并進(jìn)行測序驗(yàn)證。利用XhoⅠ和BamHⅠ雙酶切方法將Zbtb38 CDS序列連接至慢病毒載體Plvx-puro,獲得穿梭質(zhì)粒Plvx-puro-Zbtb38,再與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞生產(chǎn)慢病毒顆粒。結(jié)果顯示,引物1擴(kuò)增產(chǎn)物包含Zbtb38 CDS全序列的第1-1 794 bp,擴(kuò)增產(chǎn)物實(shí)際測序長度為1 772 bp,引物2擴(kuò)增產(chǎn)物包含Zbtb38 CDS全序列的第1 762-3 594 bp,擴(kuò)增產(chǎn)物實(shí)際測序長度為1 818 bp,說明分段擴(kuò)增目的片段已成功。引物3擴(kuò)增的預(yù)期融合產(chǎn)... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Plvx-puro-Zbtb38過表達(dá)質(zhì)粒圖譜

利用實(shí)時熒光定量PCR檢測所生產(chǎn)病毒的滴度,結(jié)果見表3。選取第一組數(shù)據(jù)計(jì)算病毒滴度:細(xì)胞數(shù)目為3.5×104,滴度為3.25×108 Tu/mL。滿足普通動物注射標(biāo)準(zhǔn)要求。圖3 引物2 PCR擴(kuò)增Zbtb38 CDS后段結(jié)果

引物2 PCR擴(kuò)增Zbtb38 CDS后段結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3614831