斑馬魚(yú)（Danio rerio）作為一種重要的模式生物,已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,如在生物醫(yī)學(xué)研究方面,斑馬魚(yú)作為研究脊椎動(dòng)物的發(fā)育和造血的模型已被廣泛采用。近年來(lái),斑馬魚(yú)也被逐步應(yīng)用于免疫相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-激活激酶1（Transforming growth factorβ-activated kinase 1,TAK1）是MAP3K家族的成員,脊椎動(dòng)物的TAK1在人和哺乳動(dòng)物中能夠調(diào)控由IL-1介導(dǎo)的NF-κB,JNK和p38的激活;TRAF家族相關(guān)的NF-κB激活因子（the TRAF family member-associated NF-κB activator,TANK）能夠參與調(diào)控核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）信號(hào)通路。但是在斑馬魚(yú)中少有關(guān)于TAK1和TANK在天然免疫中功能的報(bào)道。為探究TAK1和TANK在斑馬魚(yú)天然免疫中的作用,本研究團(tuán)隊(duì)率先在斑馬魚(yú)中展開(kāi)對(duì)TAK1和TANK的功能研究,克隆并獲得了一種斑馬魚(yú)TAK1剪接異構(gòu)體（Danio rerio TAK1,Dr TAK1）和斑馬魚(yú)TANK基因（Danio rerio TA... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DrTAK1和DrTANK的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

碩士學(xué)位論文30圖3-2：幾種脊椎動(dòng)物的TAK1，TANK的氨基酸序列比對(duì)。（A）利用進(jìn)化分析軟件（本次使用的軟件包括有：MEGA6和GeneDoc）對(duì)人、小鼠、原雞和斑馬魚(yú)TAK1的氨基酸序列進(jìn)行進(jìn)化分析。（B）利用進(jìn)化分析軟件對(duì)人、小鼠、原雞和斑馬魚(yú)TANK的氨基酸序列進(jìn)行進(jìn)化分析。Fig3-2:AminoacidsequencesalignmentofTAK1andTANKofseveralvertebrates.(A)Usingevolutionanalysissoftware(thesoftwareusedincludes:MEGA6andGeneDoc)toperformevolutionaryanalysisontheTAK1aminoacidsequencesofhuman,mouse,rawchickenandzebrafish.(B)UsingevolutionanalysissoftwaretoperformevolutionaryanalysisontheTANKaminoacidsequencesofhuman,mouse,rawchickenandzebrafish.BA

碩士學(xué)位論文32轉(zhuǎn)染進(jìn)HEK293T和EPC細(xì)胞中來(lái)探究DrTAK1和DrTANK在體外的表達(dá)情況，細(xì)胞轉(zhuǎn)染了36-48h后，收集全細(xì)胞裂解液，用于制作Western-Blot實(shí)驗(yàn)的樣品，根據(jù)構(gòu)建的表達(dá)載體的情況，轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞中的幾種質(zhì)粒表達(dá)的情況使用鼠源抗體（Flag）檢測(cè)。在兩種細(xì)胞內(nèi)DrTAK1蛋白實(shí)際表達(dá)72kDa要比預(yù)測(cè)的65kDa稍微大一些，說(shuō)明DrTAK1能夠在兩種細(xì)胞中表達(dá)（圖A、B）；同樣DrTANK在兩種細(xì)胞中均能表達(dá)，且蛋白大小為50kDa，要比預(yù)測(cè)的39.27kDa大一些（圖C、D）。圖3-4DrTAK1蛋白和DrTANK蛋白在EPC細(xì)胞與HEK-293T細(xì)胞中的表達(dá)情況。將帶有Flag標(biāo)簽的DrTAK1質(zhì)�；驇в蠪lag標(biāo)簽的DrTANK質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到（A、C）HEK293T細(xì)胞和（B、D）EPC細(xì)胞中，設(shè)置的對(duì)照組轉(zhuǎn)染空載體（pcDNA5-FRT/TO），48h后，收集EPC細(xì)胞和HEK-293T細(xì)胞并將這兩種細(xì)胞充分裂解，然后用免疫印跡法（Western-blot）分析全細(xì)胞裂解液，用Flag抗體檢測(cè)DrTAK1蛋白和DrTANK蛋白在EPC細(xì)胞和HEK-293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況，Actin作為內(nèi)參。Fig.3-3:ExpressionofDrTAK1andDrTANKproteinsinEPCcellsandHEK-293Tcells.Theflag-taggedDrTAK1plasmidortheflag-taggedDrTANKplasmidweretransfectedinto(A,C).HEK-293Tcellsand(B,D)EPCcells.Thecontrolgroupwassettotransfectanemptyvector(pcDNA5-FRT/TO).Actinwasusedtoaninternalreference.After48h,EPCcellsandHEK-293Tcellswerecollectedandfullylysed.Thewholecelllysateswereusedforimmunoblot(IB)assay.DrTAK1proteinandDrTANKproteinweredetectedinEPCcellsandHEK-293TcellswithFlagantibody.3.4DrTAK1蛋白和DrTANK蛋白在EPC細(xì)胞內(nèi)的位置根據(jù)以往的研究結(jié)果，本研究猜測(cè)DrTAK1和DrTANK應(yīng)該也是一種胞質(zhì)蛋白；為探究DrTAK1和DrTANK在魚(yú)類細(xì)胞中的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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