發(fā)布時間：2022-01-23 20:54

　　為研究不同溫度脅迫下藥用蒲公英最適內(nèi)參基因與溫度響應(yīng)相關(guān)基因的表達,分別以低溫（4℃）和高溫（38℃）脅迫0、3、6、12、24和48 h共12個處理的葉片為材料,選取10個候選內(nèi)參基因18S、EF1α、TUB、40S、GAPDH、β-actin、ACT11、TUA、60S和SKIP,利用RT-qPCR技術(shù)以及geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件評價其穩(wěn)定性。利用篩選出的最適內(nèi)參基因?qū)λ幱闷压?2個溫度響應(yīng)基因（AP2/ERF、Dof、ICE1、MYB、b ZIP、NTL6、HSF、Gols、HSP、NAC、XCT和WRKY）的表達水平進行定量分析。結(jié)果顯示:溫度脅迫下藥用蒲公英最適內(nèi)參基因為18S和GAPDH;藥用蒲公英AP2/ERF、HSF、Glos、HSP、NAC、XCT基因在低溫和高溫脅迫下均為先上調(diào)后下調(diào)表達,bZIP、NTL6在溫度脅迫下波動變化,Dof、ICE1、MYB在低溫脅迫下先上調(diào)后下調(diào)表達,高溫脅迫下持續(xù)下調(diào)表達,WRKY在高溫脅迫下表達量遠遠高于低溫脅迫。依據(jù)基因表達量推測,藥用蒲公英低溫和高溫脅迫的響應(yīng)機制存在差異,AP2/ERF、D... 

【文章來源】：園藝學報. 2020,47(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

藥用蒲公英RNA(A）和候選內(nèi)參基因瓊脂糖電泳圖譜（B)

CT值是反映基因表達豐度的重要參數(shù)。對各處理10個候選內(nèi)參基因的CT值進行統(tǒng)計（圖2),10個基因CT值在17～38之間，18S和GAPDH的CT比較小，其基因表達豐度高，ACT11、TUA、60S、SKIP的CT比較大，基因表達豐度低，EF1α、TUB、40S、β-actin的CT處于中間范圍。簡單從CT值可以看出18S在不同脅迫時期表達較為穩(wěn)定，且表達較高，可以作為內(nèi)參基因。2.3 藥用蒲公英溫度脅迫下候選內(nèi)參基因的表達穩(wěn)定性

geNorm軟件V值（配對變異值，Pairwise variation value）可以確定篩選內(nèi)參基因的數(shù)量，M值（表達穩(wěn)定值，Expression stability）可以判斷基因穩(wěn)定性，M值越小越穩(wěn)定。由圖3,A可知，配對變異值V2/3小于0.15，所以2個基因作為溫度脅迫下內(nèi)參基因組合便可滿足要求。由圖3,B可知，M值以18S和GAPDH最小，穩(wěn)定性最好，因此選擇18S和GAPDH組合作為藥用蒲公英溫度脅迫下內(nèi)參基因。2.3.2 NormFinder

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]利用基因芯片技術(shù)發(fā)掘小麥內(nèi)參基因及抗赤霉病相關(guān)基因[D]. 龍翔宇.四川農(nóng)業(yè)大學 2011

碩士論文
[1]基于實時熒光定量PCR的忍冬內(nèi)參基因篩選[D]. 劉霞宇.山西農(nóng)業(yè)大學 2017
[2]近30年華北地區(qū)夏季極端高溫天氣事件及其影響機理研究[D]. 李小鋒.蘭州大學 2015
[3]擬南芥溫度脅迫和紅光響應(yīng)基因XCT表觀遺傳機理探究[D]. 王玉晗.山東農(nóng)業(yè)大學 2014
[4]鹽堿脅迫對蒲公英種子萌發(fā)及幼苗生長影響的研究[D]. 張曉暉.新疆農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：3605133