目的:細(xì)胞定向遷移是細(xì)胞修復(fù)的重要步驟,脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）擁有強大的自我更新及多向分化潛能,其移植是組織修復(fù)的潛在治療手段。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）對多種細(xì)胞的遷移有抑制作用,本實驗為驗證抑制PPARγ基因?qū)DSCs遷移能力的影響,通過PPARγ抑制劑BADGE作用于ADSCs,觀察ADSCs遷移及增殖情況,檢測與遷移相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）以及SDF/CXCR4通路相關(guān)蛋白胞內(nèi)表達(dá)情況,探討PPARγ對ADSCs遷移所起的作用,及可能的信號通路。實驗方法:1、提取人ADSCs進行體外培養(yǎng);2、分別用含有不同濃度的PPARγ抑制劑BADGE作用于ADSCs;3、根據(jù)實驗?zāi)康姆譃槿M:A組:ADSCs+25μm/LBADGE+普通培養(yǎng)液;B組:ADSCs+50μm/LBADGE+普通培養(yǎng)液;C組:ADSCs+普通培養(yǎng)液;4、劃痕實驗及Transwell觀察ADSCs的遷移情況,PCR、Westernblot分別檢測各組MMP2、MMP9、CXCR4基因及蛋白表達(dá)水平... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

3代ADSCs形態(tài)（倒置顯微鏡，200X）

ADSCs成脂、成骨分化能力的檢測

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10AB圖2ADSCs成脂、成骨分化能力的檢測A：ADSCs成脂誘導(dǎo)后14d油紅O染色結(jié)果（光學(xué)顯微鏡，200X）B：ADSCs成骨誘導(dǎo)后21d茜素紅染色結(jié)果（光學(xué)顯微鏡，200X）3.3抑制PPARγ基因后ADSCs在二維空間的遷移能力下降在細(xì)胞劃痕的0、24、72h，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞向中央劃痕區(qū)生長（修復(fù)）的速度，應(yīng)用ImageJ軟件計算中間劃痕區(qū)域面積，如圖3，并按照如下公式計算遷移率：細(xì)胞遷移率（%）=（劃痕區(qū)面積0h－劃痕區(qū)面積72h）／劃痕區(qū)面積0h×100。在72h，普通培養(yǎng)液組遷移率約63%，25μm/LBADGE培養(yǎng)液組約43%，50μm/LBADGE培養(yǎng)液組約21%。25μm/LBADGE培養(yǎng)液組ADSCs的遷移率較普通培養(yǎng)液組降低了32%（P<0.05）；50μm/LBADGE培養(yǎng)液組ADSCs的遷移率較普通培養(yǎng)液組降低了67%（P<0.05）；25μm/L組較50μm/L組降低44%，如圖4。圖30h、24h、72h周邊細(xì)胞向劃痕區(qū)域生長情況（光鏡下50X）


本文編號：3601679