背景哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)由于其翻譯后修飾類似于人源細(xì)胞而被廣泛用于表達(dá)重組藥物蛋白。中國倉鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）細(xì)胞目前是生產(chǎn)治療性重組蛋白的首選哺乳動物細(xì)胞系。轉(zhuǎn)基因沉默和低表達(dá)水平是重組蛋白生產(chǎn)普遍存在的問題。前期實驗已經(jīng)證明,核基質(zhì)結(jié)合區(qū)（matrix attachment region,MAR）能夠提高CHO轉(zhuǎn)基因表達(dá),但MAR組合是否具備功能及其作用機(jī)制尚不清楚。目的探討MAR組合對重組CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)基因表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制。方法PCR擴(kuò)增人β-干擾素（humanβ-interferon MAR,iMAR）和β-珠蛋白MAR（humanβ-globin MAR,gMAR）序列,使用無縫克隆技術(shù)將i MAR和gMAR片段分別連接到線性載體表達(dá)盒側(cè)翼,構(gòu)建分別由巨細(xì)胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）或猴病毒（simian virus 40,SV40）啟動子驅(qū)動的重組質(zhì)粒載體。轉(zhuǎn)染CHO-K1細(xì)胞48 h后,用熒光顯微鏡分析轉(zhuǎn)染效率和增強(qiáng)綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pEGFP-C1載體示意圖

圖 2：載體構(gòu)建示意圖毒 40 早期聚腺苷酸化信號；EGFP，增強(qiáng)綠色熒光蛋白；質(zhì)粒用 Not I 和 Mlu I 雙酶切；將合成的 SV40 啟動子pn I 和 BamH I 雙酶切；將合成的 Spacer 片段及 p I、Pac I 和 Bstz17 I 雙酶切，酶切體系如下：-C1 質(zhì)粒的雙酶切體系如下：反應(yīng)液組分 體積（μl）pEGFP-C1 質(zhì)粒 8.0（4 μg）10×H buffer 2.0Not I 0.5（100 U）Mlu I 0.5（100 U）ddH2O 9放入 37 ℃水浴鍋中孵育 3 h。

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文細(xì)胞 2 遍，之后加入 500 μl PBS 重懸（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）對數(shù)異采用單因素方差分析，組間比較采用的。CR 擴(kuò)增片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示所和 gMAR 大小分別為 2201bp 和 2160b

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3600580