為了驗證小麥硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運蛋白（Nitrate transporters,NRT）TaNRT2.1及其輔助蛋白TaNAR2.1的硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運功能,本研究一方面構(gòu)建了TaNRT2.1單基因（單超）和TaNRT2.1+TaNAR2.1雙基因（雙超）超表達載體,采用根癌農(nóng)桿菌介導的蘸花法轉(zhuǎn)化了野生型擬南芥,利用潮霉素篩選與PCR鑒定分別獲得了3個單超與2個雙超轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系。通過研究轉(zhuǎn)基因擬南芥的硝態(tài)氮吸收動力學和氮吸收表型明確了超表達TaNRT2.1對擬南芥生長和氮吸收的影響;另一方面構(gòu)建了大麥條紋花葉病毒誘導的基因沉默（BSMV-VIGS）載體,研究了VIGS沉默對小麥根內(nèi)TaNRT2.1基因表達和氮吸收速率的影響,通過分析不同小麥品種間沉默效果的差異明確了沉默TaNRT2.1對小麥生長和氮吸收的影響。主要得到以下結(jié)果:1.硝態(tài)氮濃度<1 mmol·L^-1時,不論單超還是雙超均不能提高擬南芥的硝態(tài)氮吸收速率。硝態(tài)氮濃度>1 mmol·L^-1時,僅雙超能顯著提高擬南芥的硝態(tài)氮吸收速率。雙超擬南芥的¹⁵NO

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

VIGS的基本誘導機制Figure1-1ThebasicinductionmechanismofVIGS(田煥煥等,2014)

圖 2-1 表達載體Figure 2-1 Expression vector.1.2 擬南芥的種植與培養(yǎng)以本實驗室保存的擬南芥（Arabidopsis thaliana）種子（Columbia 生態(tài)型）為材擬南芥進行種植與培養(yǎng)，將它記作野生型（wild type, WT）。擬南芥種子的消毒：用無水乙醇配制 70%（v/v）的酒精，用次氯酸鈉配制 3%（ NaClO 溶液。將保存于-20°C 冰箱中的擬南芥種子放入 1.5 ml 的小離心管中，加水，震蕩數(shù)次，高速離心 15 秒（s），將上清及漂浮的種子去掉。然后加入 70% 過種子消毒 3 分鐘（min），用移液槍將酒精吸出，再加入 3% 的 NaClO 溶液浸in，吸出 NaClO 溶液，用無菌水將種子沖洗 3 次。將上述處理過的種子放入 4°低溫處理 3 天（d），備用。擬南芥的播種：培養(yǎng)基質(zhì)采用的蛭石、珍珠巖和草炭灰（1:1:1）的混合基質(zhì)，用前先在 121°C 高溫高壓條件下滅菌 1 小時（h），然后將滅過菌的基質(zhì)裝到直徑

圖 2-2 不同 T3代轉(zhuǎn)基因擬南芥株系潮霉素抗性基因及 TaNRT2.1 基因的 PCR 檢測Figure 2-2 PCR detection of hygromycin resistance gene and TaNRT2.1 gene in T3transgenic plof different lines .注：Ctrl-陰性對照，n=2（每個株系 2 個生物學重復）。Note: Ctrl- negative control, n=2 (2 biological replicates of each line).2.2.2 超表達 TaNRT2.1 對擬南芥硝態(tài)氮吸收動力學的影響高氮（15.0 mmol L-1NO3-）條件下，單超株系 N1-28 與雙超株系 N2-18 芥的生長狀況均好于野生型（圖 2-3）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]超表達小麥硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運蛋白基因TaNRT2.1對擬南芥生長及氮吸收的影響[J]. 李文虎,田匯,高亞軍.  植物生理學報. 2018(04)
[2]15N短時標記法鑒定煙草‘K326’和‘紅花大金元’吸收NO3–和NH4+的生理動力學特征[J]. 何明潔,范騰飛,楊超,陳益銀,李迪秦,李常軍,劉來華.  植物生理學報. 2017(04)
[3]植物硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白研究進展[J]. 張合瓊,張漢馬,梁永書,南文斌.  植物生理學報. 2016(02)
[4]Improving Nitrogen Use Efficiency in Rice through Enhancing Root Nitrate Uptake Mediated by a Nitrate Transporter, NRT1.1B[J]. ZhiChang Chen,JianFeng Ma.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(09)
[5]植物氮素吸收及其轉(zhuǎn)運蛋白研究進展[J]. 段娜,章堯想,劉芳,徐軍,王佳.  分子植物育種. 2015(02)
[6]NRT基因與氮素利用效率的研究進展[J]. 王波,馬行,劉瑩瑩,過昱辰.  北方園藝. 2014(20)
[7]小麥幼苗葉片中硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白NRT1和NRT2家族基因?qū)Φ囸I響應的表達分析[J]. 軒紅梅,王永華,魏利婷,楊瑩瑩,王利娜,康國章,郭天財.  麥類作物學報. 2014(08)
[8]香根草對不同形態(tài)氮吸收動力學特性研究[J]. 王曉,徐玉良,李光星,劉喜坤,劉倩.  華中師范大學學報(自然科學版). 2013(06)
[9]VIGS技術在禾本科植物中的應用研究進展[J]. 李淼淼,南富波,劉偉,李衛(wèi)華.  麥類作物學報. 2013(02)
[10]植物硝酸鹽轉(zhuǎn)運體的功能及其調(diào)控[J]. 尹輝,牟書勇,李冠.  南方農(nóng)業(yè)學報. 2012(04)

博士論文
[1]水稻高親和硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白基因OsNRT2.3a/b生物學功能分析[D]. 唐仲.南京農(nóng)業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]擬南芥硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運功能缺失突變體的氮素吸收特征研究[D]. 聶淼.西北農(nóng)林科技大學 2016



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