為了驗(yàn)證小麥硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Nitrate transporters,NRT）TaNRT2.1及其輔助蛋白TaNAR2.1的硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)功能,本研究一方面構(gòu)建了TaNRT2.1單基因（單超）和TaNRT2.1+TaNAR2.1雙基因（雙超）超表達(dá)載體,采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蘸花法轉(zhuǎn)化了野生型擬南芥,利用潮霉素篩選與PCR鑒定分別獲得了3個(gè)單超與2個(gè)雙超轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系。通過研究轉(zhuǎn)基因擬南芥的硝態(tài)氮吸收動(dòng)力學(xué)和氮吸收表型明確了超表達(dá)TaNRT2.1對(duì)擬南芥生長(zhǎng)和氮吸收的影響;另一方面構(gòu)建了大麥條紋花葉病毒誘導(dǎo)的基因沉默（BSMV-VIGS）載體,研究了VIGS沉默對(duì)小麥根內(nèi)TaNRT2.1基因表達(dá)和氮吸收速率的影響,通過分析不同小麥品種間沉默效果的差異明確了沉默TaNRT2.1對(duì)小麥生長(zhǎng)和氮吸收的影響。主要得到以下結(jié)果:1.硝態(tài)氮濃度<1 mmol·L^-1時(shí),不論單超還是雙超均不能提高擬南芥的硝態(tài)氮吸收速率。硝態(tài)氮濃度>1 mmol·L^-1時(shí),僅雙超能顯著提高擬南芥的硝態(tài)氮吸收速率。雙超擬南芥的¹⁵NO

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

VIGS的基本誘導(dǎo)機(jī)制Figure1-1ThebasicinductionmechanismofVIGS(田煥煥等,2014)

圖 2-1 表達(dá)載體Figure 2-1 Expression vector.1.2 擬南芥的種植與培養(yǎng)以本實(shí)驗(yàn)室保存的擬南芥（Arabidopsis thaliana）種子（Columbia 生態(tài)型）為材擬南芥進(jìn)行種植與培養(yǎng)，將它記作野生型（wild type, WT）。擬南芥種子的消毒：用無水乙醇配制 70%（v/v）的酒精，用次氯酸鈉配制 3%（ NaClO 溶液。將保存于-20°C 冰箱中的擬南芥種子放入 1.5 ml 的小離心管中，加水，震蕩數(shù)次，高速離心 15 秒（s），將上清及漂浮的種子去掉。然后加入 70% 過種子消毒 3 分鐘（min），用移液槍將酒精吸出，再加入 3% 的 NaClO 溶液浸in，吸出 NaClO 溶液，用無菌水將種子沖洗 3 次。將上述處理過的種子放入 4°低溫處理 3 天（d），備用。擬南芥的播種：培養(yǎng)基質(zhì)采用的蛭石、珍珠巖和草炭灰（1:1:1）的混合基質(zhì)，用前先在 121°C 高溫高壓條件下滅菌 1 小時(shí)（h），然后將滅過菌的基質(zhì)裝到直徑

圖 2-2 不同 T3代轉(zhuǎn)基因擬南芥株系潮霉素抗性基因及 TaNRT2.1 基因的 PCR 檢測(cè)Figure 2-2 PCR detection of hygromycin resistance gene and TaNRT2.1 gene in T3transgenic plof different lines .注：Ctrl-陰性對(duì)照，n=2（每個(gè)株系 2 個(gè)生物學(xué)重復(fù)）。Note: Ctrl- negative control, n=2 (2 biological replicates of each line).2.2.2 超表達(dá) TaNRT2.1 對(duì)擬南芥硝態(tài)氮吸收動(dòng)力學(xué)的影響高氮（15.0 mmol L-1NO3-）條件下，單超株系 N1-28 與雙超株系 N2-18 芥的生長(zhǎng)狀況均好于野生型（圖 2-3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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