目前基因治療已經(jīng)成為精準(zhǔn)醫(yī)療體系中重要組成部分。然而,靶標(biāo)基因在體內(nèi)表達(dá)量的不可控給基因治療的安全性帶來一定風(fēng)險。本研究在雌激素受體誘導(dǎo)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化構(gòu)建了全人源基因調(diào)控系統(tǒng),并通過綠色熒光（Green fluorescent protein,GFP）或熒光素酶（Gaussia luciferase,Gluc）跟蹤誘導(dǎo)系統(tǒng)的活性。當(dāng)使用外源誘導(dǎo)藥物4-羥基他莫昔芬和內(nèi)源誘導(dǎo)藥物17β-雌二醇進(jìn)行誘導(dǎo)時,前者可以高效誘導(dǎo)GFP和Gluc在HEK293細(xì)胞中的表達(dá),并且表達(dá)強度與劑量呈正相關(guān)。通過水高壓將載體注入小鼠體內(nèi),進(jìn)行藥物誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),4-羥基他莫昔芬更高效的誘導(dǎo)報告基因GFP的表達(dá)。成年小鼠尾靜脈注射1×10¹³vg/kg的AAV2/8-pZFHD1-hER-GFP病毒實驗結(jié)果顯示,第一次給藥后,能夠明顯觀察到GFP在肝臟組織的表達(dá),但是藥物在小鼠體內(nèi)被代謝后,GFP的表達(dá)消失;當(dāng)再次給藥后,GFP熒光又重新被誘導(dǎo)。綜上所述,本研究構(gòu)建的人源化雌激素受體介導(dǎo)的調(diào)控系統(tǒng)在體內(nèi)外均可調(diào)控目的基因的表達(dá)及開關(guān)。 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,51(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

全人源基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的模式圖

為了探究外源藥物的誘導(dǎo)效率與HEK293細(xì)胞毒性的關(guān)系,使用0.001-10μmol/L的4-OHT和17β-E2誘導(dǎo)48h后檢測細(xì)胞上清液中熒光素酶的表達(dá),結(jié)果如圖4。兩種誘導(dǎo)劑在0.001μmol/L即可顯著誘導(dǎo)外源基因的表達(dá),且隨著藥物濃度的增加逐漸上升,誘導(dǎo)系統(tǒng)有著良好的藥物靈敏性。隨著藥物濃度越高,hER系統(tǒng)所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性也越大(圖5)。4-OHT和17β-E2濃度在0.5μmol/L以上時,細(xì)胞的存活率均顯著下降(P<0.001)。為了保證較低的細(xì)胞毒性與較高的表達(dá)水平,最適的誘導(dǎo)濃度范圍在0.3-0.5μmol/L。圖3 HEK293細(xì)胞Gluc表達(dá)結(jié)果

圖2 HEK293細(xì)胞中GFP表達(dá)結(jié)果(標(biāo)尺=100μm),綠色熒光(圖中白色點狀物)為GFP蛋白表達(dá)圖4 HEK293細(xì)胞中4-OHT、17β-E2在不同濃度下的Gluc基因表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]他莫昔芬臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 丁瑜莉,王海霞,俞騰飛.  國際藥學(xué)研究雜志. 2016(02)
[2]米非司酮聯(lián)合他莫昔芬治療子宮肌瘤100例療效分析[J]. 彭躍輝.  中國當(dāng)代醫(yī)藥. 2010(21)



本文編號：3594428