目的成功構建Testin基因重組慢病毒過表達載體,檢測其轉染人胚腎上皮細胞系293T的表達情況,并將其修飾人胎盤間充質干細胞（h PMSCs）,構建穩(wěn)定表達Testin蛋白的h PMSCs細胞株。方法將聚合酶鏈反應（PCR）擴增目的基因Testin插入慢病毒載體p HBLVCMVIE-Zs Green-Puro中,構建慢病毒表達質粒p HBLV-Testin并轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞DH5α;經PCR、DNA測序和比對分析后,用Lipofiter TM脂質體將重組慢病毒表達載體p HBLV-Testin和輔助包裝質（p SPAX2,p MD2G）共轉染293T細胞包裝成重組慢病毒顆粒,濃縮上清并測定病毒滴度。將成功包裝的Testin過表達慢病毒載體（p HBLV-Testin）轉染293T,用蛋白質印跡法（Western Blot）檢測Testin蛋白的表達情況。用p HBLV-Testin重組慢病毒載體轉染h PMSCs細胞并確定最佳感染復數（MOI）,經western blot檢測相關蛋白表達,經CCK-8檢測感染的h PMSCs細胞增殖活性,以空載體組（p HBLV-null）及無... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因Testin的PCR擴增產物凝膠電泳分析

27圖 2 pHBLV-Testin 陽性克隆 PCR 鑒定瓊脂糖凝膠電泳圖：DNAMarkerLane 1-8：TES 單克隆鑒定 PCR 產物均可見長度為 1 266 bp 左右基因與目的基因 Testin 大小基本一致。

PCR鑒定正確的TES基因測序峰圖及BLAST軟件分析結果

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3582684