發(fā)布時(shí)間：2022-01-11 11:15

　　目的成功構(gòu)建Testin基因重組慢病毒過(guò)表達(dá)載體,檢測(cè)其轉(zhuǎn)染人胚腎上皮細(xì)胞系293T的表達(dá)情況,并將其修飾人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞（h PMSCs）,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Testin蛋白的h PMSCs細(xì)胞株。方法將聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增目的基因Testin插入慢病毒載體p HBLVCMVIE-Zs Green-Puro中,構(gòu)建慢病毒表達(dá)質(zhì)粒p HBLV-Testin并轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α;經(jīng)PCR、DNA測(cè)序和比對(duì)分析后,用Lipofiter TM脂質(zhì)體將重組慢病毒表達(dá)載體p HBLV-Testin和輔助包裝質(zhì)（p SPAX2,p MD2G）共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝成重組慢病毒顆粒,濃縮上清并測(cè)定病毒滴度。將成功包裝的Testin過(guò)表達(dá)慢病毒載體（p HBLV-Testin）轉(zhuǎn)染293T,用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測(cè)Testin蛋白的表達(dá)情況。用p HBLV-Testin重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染h PMSCs細(xì)胞并確定最佳感染復(fù)數(shù)（MOI）,經(jīng)western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá),經(jīng)CCK-8檢測(cè)感染的h PMSCs細(xì)胞增殖活性,以空載體組（p HBLV-null）及無(wú)... 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因Testin的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳分析

27圖 2 pHBLV-Testin 陽(yáng)性克隆 PCR 鑒定瓊脂糖凝膠電泳圖：DNAMarkerLane 1-8：TES 單克隆鑒定 PCR 產(chǎn)物均可見(jiàn)長(zhǎng)度為 1 266 bp 左右基因與目的基因 Testin 大小基本一致。

PCR鑒定正確的TES基因測(cè)序峰圖及BLAST軟件分析結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]間充質(zhì)干細(xì)胞更改名稱的時(shí)候到了[J]. 阿諾得 卡普蘭,廖聯(lián)明,王萍,譚建明.  中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2017(05)
[2]USPIO標(biāo)記臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植缺血缺氧腦病乳鼠的MRI示蹤研究[J]. 張靚,張永峰,王雪芹,張文華.  濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(02)
[3]間充質(zhì)干細(xì)胞多模態(tài)示蹤方法的應(yīng)用[J]. 吳春,姜在波,朱康順,黃明聲,關(guān)守海,李征然,錢結(jié)勝,李名安,單鴻.  中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù). 2017(02)
[4]PTEN mRNA編輯的間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞殺傷作用研究[J]. 郭興榮,王小莉,袁雅紅,涂漢軍.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(04)
[5]結(jié)直腸癌研究30年回顧和現(xiàn)狀[J]. 鄭樹(shù),張?zhí)K展,黃彥欽.  實(shí)用腫瘤雜志. 2016(01)
[6]TESTIN基因、RUNX3基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 龍結(jié)根,張志堅(jiān),張才全.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(04)
[7]移植途徑對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢及肝功能恢復(fù)的影響[J]. 何秀華,李東良,江軍,徐穎,范敬靜,陳娟,陳勝平.  中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2011(01)
[8]Testin基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 龍結(jié)根,張才全,趙林.  中國(guó)癌癥雜志. 2009(06)



本文編號(hào)：3582684