口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）是一類(lèi)極具破壞性且致命的惡性腫瘤,在所有頭頸部惡性腫瘤當(dāng)中占有很大比例,已經(jīng)成為人類(lèi)健康的一大殺手。口腔鱗狀細(xì)胞癌因?yàn)槠涮厥獾慕馄饰恢?常嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量且多數(shù)預(yù)后不良。人們的日常不良習(xí)慣,如吸煙和飲酒等是癌癥轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素,而腫瘤的轉(zhuǎn)移是癌癥患者面臨的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題。據(jù)統(tǒng)計(jì),超過(guò)90%的癌癥相關(guān)死亡率是由于轉(zhuǎn)移。在口腔鱗狀細(xì)胞癌當(dāng)中,有超過(guò)50%的病人出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,而這些患者的5年生存率顯著下降。人類(lèi)激肽釋放酶基因家族（kallikrein,KLKs）是人類(lèi)基因中最大的絲氨酸蛋白酶基因簇。KLKs是由15個(gè)不同基因編碼的絲氨酸蛋白酶,其定位于人類(lèi)染色體19q13.4上,是一組高度保守的基因結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)序列。KLKs在多個(gè)組織器官中表達(dá)。在許多生理過(guò)程中KLKs都扮演著重要角色。最近,KLKs被報(bào)道在腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要功能,并被認(rèn)為是各種癌癥的生物標(biāo)志物。許多KLKs在各種惡性腫瘤中表現(xiàn)出異常表達(dá),被認(rèn)為是疾病發(fā)展的預(yù)后標(biāo)志。目前的研究表明,KLKs與口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）密切相關(guān),涉及到腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移等諸多方面,而嚴(yán)重影響了人類(lèi)的... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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KLKs促進(jìn)惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制

圖 3.1 干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的口腔鱗癌細(xì)胞 KLK4 表達(dá)明顯降低通過(guò)實(shí)時(shí)定量 PCR 方法檢測(cè) KLK4 表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了干擾片段和無(wú)關(guān)序列片段質(zhì)粒的口腔鱗癌細(xì)胞的 KLK4 表達(dá)明顯降低，純細(xì)胞組和陰性對(duì)照組的 KLK4 表達(dá)無(wú)顯著異。分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了干擾片段的口腔鱗癌細(xì)胞的 KLK4 表達(dá)明顯降低，其沉默效率在 KB 細(xì)胞達(dá)到約 84%，而在 Tca-8113 細(xì)胞達(dá)到約 78%。三小結(jié)經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)合成 KLK4 基因的干擾片段和無(wú)關(guān)序列片段 (siRNA for KLK4：5′-AATCCGTGTCCGAGTCTGAC-3′)，并將上述片段分別構(gòu)建至 pGCsi-H1 的質(zhì)粒中，獲得 pGCsi-H1-KLK4 的干擾質(zhì)粒和 pGCsi-H1-NC 的對(duì)照質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞 KB、Tca-8113，用 G418 篩選，從而獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pGCsi-H1-KLK4 的細(xì)胞系和對(duì)照細(xì)胞系；同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)定量 PCR 的方法驗(yàn)證了

圖 3.1 MTT 檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力通過(guò) MTT 檢測(cè)可見(jiàn) KLK4 基因干擾能夠顯著抑制口腔鱗癌細(xì)胞增殖能力，而純細(xì)胞組和陰性對(duì)照組的細(xì)胞增殖能力無(wú)顯著差異。二流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期1 主要設(shè)備試劑1.1 主要設(shè)備表 2.1 實(shí)驗(yàn)所用主要設(shè)備Tab2.1 Main equipments for the experiment設(shè)備名稱(chēng) 生產(chǎn)企業(yè)超純水系統(tǒng) 香港 Heal Force超速冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湖南湘儀


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