發(fā)布時(shí)間：2022-01-11 03:29

　　單寧�；饷福▎螌幟�,EC3.1.1.20）可催化單寧的水解,廣泛應(yīng)用于皮革、制藥、飲料和食品工業(yè)。目前主要應(yīng)用于茶葉、橡子酒和生產(chǎn)沒(méi)食子酸。同時(shí),單寧酶可用作果汁澄清劑和咖啡軟飲料的調(diào)味劑,有助于減少單寧對(duì)茶飲料和食品中的不利影響;用于動(dòng)物食品制劑中作為添加劑,提高動(dòng)物的消化率;用于環(huán)境生物技術(shù),例如處理富含多酚類物質(zhì)的制革廢水。產(chǎn)單寧酶微生物種類繁多,在大部分真菌、細(xì)菌和酵母中均存在,其中曲霉菌屬產(chǎn)單寧酶量最高。本文以一株低蛋白背景的黑曲霉菌株為出發(fā)菌株,構(gòu)建單寧酶黑曲霉表達(dá)系統(tǒng),對(duì)黑曲霉基因組中單寧酶基因進(jìn)行挖掘,篩選出單寧酶酶活最高的菌株,并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究,主要研究了以下內(nèi)容:（1）從AspGD數(shù)據(jù)庫(kù)中找到黑曲霉中有17個(gè)與單寧酶有關(guān)的基因,將其氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析。利用同源重組原理成功構(gòu)建出17個(gè)單寧酶的黑曲霉過(guò)量表達(dá)菌株。（2）利用適合測(cè)定胞外單寧酶酶活的可見(jiàn)分光光度法,對(duì)17株重組單寧酶菌株進(jìn)行酶活的測(cè)定及蛋白含量的測(cè)定,最后篩選出單寧酶酶活最高的一株黑曲霉轉(zhuǎn)化株Bdel4_Tan7,發(fā)酵液上清第168 h酶活最高達(dá)到111.9... 

【文章來(lái)源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

單寧的分類Fig1-1Classificationoftannins

圖 1-2 沒(méi)食子單寧的酶促生物降解途徑Fig 1-2 Gallotannin enzymatic biodegradation pathways寧酶寧酶（單寧�；饷�，EC 3.1.1.20）是一種在單寧酸等底物或底物類似的誘導(dǎo)酶[12]，可以在水相中水解沒(méi)食子酸單寧和沒(méi)食子酸酯類中的酯鍵及并在有機(jī)相中與各種醇和二醇合成沒(méi)食子酸酯。單寧酶的性質(zhì)寧酶廣泛存在于細(xì)菌、酵母、霉菌和植物中[13]，尤其在黑曲霉和米曲霉中外觀呈白色或淡黑色粉末，可溶于水形成無(wú)色、澄清、透明的溶液，不溶于 nm 處有吸收峰[6]。寧酶的理化性質(zhì)是單寧酶研究中比較熱門的話題之一，如表 1-1 所示。單

第二章 黑曲霉基因組單寧酶基因的挖掘及高效表達(dá)工程菌的篩選.06 MPa，溫度為 34℃，初始風(fēng)量為 1 m3/h，初始轉(zhuǎn)速為 200 rpm，溶氧控制氧低于 50%時(shí)，逐步提高風(fēng)量和轉(zhuǎn)速），初始 pH 為 5.5，當(dāng) pH 降至 4.5 時(shí)H 為 4.5 的條件下培養(yǎng)，將濃度為 39%~42%的麥芽糖漿作為補(bǔ)料液。測(cè)定發(fā)酵液酶活。驗(yàn)結(jié)果與討論黑曲霉基因組中的單寧酶基因分析結(jié)果 17 個(gè)單寧酶基因的氨基酸序列用軟件 MEGA7 進(jìn)行比對(duì)得到系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)所示。


本文編號(hào)：3581996