發(fā)布時間：2022-01-11 03:29

　　單寧�；饷福▎螌幟�,EC3.1.1.20）可催化單寧的水解,廣泛應(yīng)用于皮革、制藥、飲料和食品工業(yè)。目前主要應(yīng)用于茶葉、橡子酒和生產(chǎn)沒食子酸。同時,單寧酶可用作果汁澄清劑和咖啡軟飲料的調(diào)味劑,有助于減少單寧對茶飲料和食品中的不利影響;用于動物食品制劑中作為添加劑,提高動物的消化率;用于環(huán)境生物技術(shù),例如處理富含多酚類物質(zhì)的制革廢水。產(chǎn)單寧酶微生物種類繁多,在大部分真菌、細(xì)菌和酵母中均存在,其中曲霉菌屬產(chǎn)單寧酶量最高。本文以一株低蛋白背景的黑曲霉菌株為出發(fā)菌株,構(gòu)建單寧酶黑曲霉表達系統(tǒng),對黑曲霉基因組中單寧酶基因進行挖掘,篩選出單寧酶酶活最高的菌株,并對其酶學(xué)性質(zhì)進行研究,主要研究了以下內(nèi)容:（1）從AspGD數(shù)據(jù)庫中找到黑曲霉中有17個與單寧酶有關(guān)的基因,將其氨基酸序列進行比對進行系統(tǒng)進化樹分析。利用同源重組原理成功構(gòu)建出17個單寧酶的黑曲霉過量表達菌株。（2）利用適合測定胞外單寧酶酶活的可見分光光度法,對17株重組單寧酶菌株進行酶活的測定及蛋白含量的測定,最后篩選出單寧酶酶活最高的一株黑曲霉轉(zhuǎn)化株Bdel4_Tan7,發(fā)酵液上清第168 h酶活最高達到111.9... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

單寧的分類Fig1-1Classificationoftannins

圖 1-2 沒食子單寧的酶促生物降解途徑Fig 1-2 Gallotannin enzymatic biodegradation pathways寧酶寧酶（單寧�；饷�，EC 3.1.1.20）是一種在單寧酸等底物或底物類似的誘導(dǎo)酶[12]，可以在水相中水解沒食子酸單寧和沒食子酸酯類中的酯鍵及并在有機相中與各種醇和二醇合成沒食子酸酯。單寧酶的性質(zhì)寧酶廣泛存在于細(xì)菌、酵母、霉菌和植物中[13]，尤其在黑曲霉和米曲霉中外觀呈白色或淡黑色粉末，可溶于水形成無色、澄清、透明的溶液，不溶于 nm 處有吸收峰[6]。寧酶的理化性質(zhì)是單寧酶研究中比較熱門的話題之一，如表 1-1 所示。單

第二章 黑曲霉基因組單寧酶基因的挖掘及高效表達工程菌的篩選.06 MPa，溫度為 34℃，初始風(fēng)量為 1 m3/h，初始轉(zhuǎn)速為 200 rpm，溶氧控制氧低于 50%時，逐步提高風(fēng)量和轉(zhuǎn)速），初始 pH 為 5.5，當(dāng) pH 降至 4.5 時H 為 4.5 的條件下培養(yǎng)，將濃度為 39%~42%的麥芽糖漿作為補料液。測定發(fā)酵液酶活。驗結(jié)果與討論黑曲霉基因組中的單寧酶基因分析結(jié)果 17 個單寧酶基因的氨基酸序列用軟件 MEGA7 進行比對得到系統(tǒng)進化樹所示。


本文編號：3581996