鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin,CRT）是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或肌質(zhì)網(wǎng)膜上的鈣離子結(jié)合蛋白,主要參與調(diào)控蛋白質(zhì)的正確折疊,維持昆蟲體內(nèi)鈣離子的平衡以及昆蟲免疫反應(yīng).基于稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis）的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,我們鑒定到兩個(gè)Calreticulin基因,分別命名為CmCRT1和CmCRT2.CmCRT1開放閱讀框?yàn)?194 bp,編碼397個(gè)氨基酸;CmCRT2的開放閱讀框?yàn)?206 bp,編碼401個(gè)氨基酸.進(jìn)化樹分析顯示CmCRT1主要與大蠟螟CRT有較高的同源性,而CmCRT2主要與麗蠅蛹集金小峰的CRT保持較高的親緣關(guān)系.組織表達(dá)分析顯示CmCRT在血淋巴中具有較高的表達(dá)水平,其次是脂肪體及中腸.發(fā)育時(shí)期表達(dá)分析表明CmCRTs主要在稻縱卷葉螟的蛹期及成蟲期表達(dá).此外,CmCRT基因經(jīng)大腸桿菌（Escherichia coli）刺激后可被顯著誘導(dǎo)表達(dá).綜上所述,本研究為進(jìn)一步研究稻縱卷葉螟CRT的功能奠定基礎(chǔ). 

【文章來源】：贛南師范大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,41(06)

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稻縱卷葉螟CmCRTs的結(jié)構(gòu)特征

為了確定CmCRTs基因在稻縱卷葉螟(C. medinalis)幼蟲不同組織及其不同發(fā)育階段的表達(dá)模式,利用熒光定量PCR對幼蟲的中腸,表皮,血淋巴,脂肪體及頭,以及對處于1齡,2齡,3齡,4齡階段及蛹,成蟲期的相對表達(dá)量進(jìn)行檢測.結(jié)果顯示,CmCRT1在稻縱卷葉螟幼蟲組織中的表達(dá)模式為:在血淋巴中的表達(dá)量為在表皮中的表達(dá)量的7.58倍,在脂肪體中的表達(dá)量為在表皮中的表達(dá)量的3.3倍,而在頭及表皮中的表達(dá)量類似;CmCRT1在稻縱卷葉螟不同發(fā)育階段的表達(dá)模式為:相對于蛹期及成蟲期,在蟲體早期(1齡,2齡,3齡,4齡)低表達(dá);CmCRT2則在血淋巴中高表達(dá),為在頭中的12.57倍,在脂肪體中的表達(dá)量為在頭的9.77倍;CmCRT2在稻縱卷葉螟的1齡至3齡第1天低表達(dá),但在3齡第1天之后的表達(dá)量迅速增多,直至蛹期,如圖6所示.2.5 CmCRT在經(jīng)免疫刺激后稻縱卷葉螟幼蟲中的表達(dá)模式

2.5 CmCRT在經(jīng)免疫刺激后稻縱卷葉螟幼蟲中的表達(dá)模式CRT基因在許多微生物中已成功被誘導(dǎo)表達(dá).為了確定CmCRTs在經(jīng)免疫刺激后的稻縱卷葉螟(C. medinalis)幼蟲中的表達(dá)模式,利用RT-qPCR及Western blot檢測其在幼蟲整體中的表達(dá)量.結(jié)果顯示,經(jīng)大腸桿菌(E.coli)處理4 h時(shí),CmCRT1基因的mRNA表達(dá)量顯著上調(diào),而在4 h至8 h時(shí)間段內(nèi)則下降;在經(jīng)大腸桿菌(E.coli)處理24 h時(shí),CmCRT1基因的mRNA表達(dá)量對比其在12 h時(shí)的表達(dá)量保持在一個(gè)較高的水平;而CmCRT1蛋白質(zhì)的表達(dá)量在幼蟲經(jīng)大腸桿菌(E.coli)免疫刺激后的不同時(shí)間中的表達(dá)量與其mRNA在相對應(yīng)的時(shí)間段的表達(dá)模式類似,如圖7所示.


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