鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin,CRT）是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或肌質(zhì)網(wǎng)膜上的鈣離子結(jié)合蛋白,主要參與調(diào)控蛋白質(zhì)的正確折疊,維持昆蟲體內(nèi)鈣離子的平衡以及昆蟲免疫反應(yīng).基于稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis）的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,我們鑒定到兩個Calreticulin基因,分別命名為CmCRT1和CmCRT2.CmCRT1開放閱讀框為3194 bp,編碼397個氨基酸;CmCRT2的開放閱讀框為1206 bp,編碼401個氨基酸.進化樹分析顯示CmCRT1主要與大蠟螟CRT有較高的同源性,而CmCRT2主要與麗蠅蛹集金小峰的CRT保持較高的親緣關(guān)系.組織表達分析顯示CmCRT在血淋巴中具有較高的表達水平,其次是脂肪體及中腸.發(fā)育時期表達分析表明CmCRTs主要在稻縱卷葉螟的蛹期及成蟲期表達.此外,CmCRT基因經(jīng)大腸桿菌（Escherichia coli）刺激后可被顯著誘導(dǎo)表達.綜上所述,本研究為進一步研究稻縱卷葉螟CRT的功能奠定基礎(chǔ). 

【文章來源】：贛南師范大學(xué)學(xué)報. 2020,41(06)

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【部分圖文】：

稻縱卷葉螟CmCRTs的結(jié)構(gòu)特征

為了確定CmCRTs基因在稻縱卷葉螟(C. medinalis)幼蟲不同組織及其不同發(fā)育階段的表達模式,利用熒光定量PCR對幼蟲的中腸,表皮,血淋巴,脂肪體及頭,以及對處于1齡,2齡,3齡,4齡階段及蛹,成蟲期的相對表達量進行檢測.結(jié)果顯示,CmCRT1在稻縱卷葉螟幼蟲組織中的表達模式為:在血淋巴中的表達量為在表皮中的表達量的7.58倍,在脂肪體中的表達量為在表皮中的表達量的3.3倍,而在頭及表皮中的表達量類似;CmCRT1在稻縱卷葉螟不同發(fā)育階段的表達模式為:相對于蛹期及成蟲期,在蟲體早期(1齡,2齡,3齡,4齡)低表達;CmCRT2則在血淋巴中高表達,為在頭中的12.57倍,在脂肪體中的表達量為在頭的9.77倍;CmCRT2在稻縱卷葉螟的1齡至3齡第1天低表達,但在3齡第1天之后的表達量迅速增多,直至蛹期,如圖6所示.2.5 CmCRT在經(jīng)免疫刺激后稻縱卷葉螟幼蟲中的表達模式

2.5 CmCRT在經(jīng)免疫刺激后稻縱卷葉螟幼蟲中的表達模式CRT基因在許多微生物中已成功被誘導(dǎo)表達.為了確定CmCRTs在經(jīng)免疫刺激后的稻縱卷葉螟(C. medinalis)幼蟲中的表達模式,利用RT-qPCR及Western blot檢測其在幼蟲整體中的表達量.結(jié)果顯示,經(jīng)大腸桿菌(E.coli)處理4 h時,CmCRT1基因的mRNA表達量顯著上調(diào),而在4 h至8 h時間段內(nèi)則下降;在經(jīng)大腸桿菌(E.coli)處理24 h時,CmCRT1基因的mRNA表達量對比其在12 h時的表達量保持在一個較高的水平;而CmCRT1蛋白質(zhì)的表達量在幼蟲經(jīng)大腸桿菌(E.coli)免疫刺激后的不同時間中的表達量與其mRNA在相對應(yīng)的時間段的表達模式類似,如圖7所示.


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