目的:前期研究結(jié)果表明,釘螺頭足部組織浸出液（protein extract from head-foot tissue of Oncomelanian hupensis,PhfO）具有促進(jìn)共培養(yǎng)日本血吸蟲(chóng)母胞蚴生長(zhǎng)發(fā)育的功能,但其潛在的分子調(diào)控機(jī)制尚不明確。果糖二磷酸醛縮酶（Fructose-1,6-bisphosphate aldolase,ALD）是糖酵解過(guò)程中的重要裂解酶,參與日本血吸蟲(chóng)的能量代謝,在PhfO共培養(yǎng)母胞蚴體內(nèi)呈差異性上調(diào)表達(dá),可能是調(diào)控母胞蚴生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵基因。本課題在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究PhfO調(diào)控蟲(chóng)體ald基因促進(jìn)共培養(yǎng)母胞蚴生長(zhǎng)發(fā)育的作用機(jī)制。方法:利用體外建立的PhfO與日本血吸蟲(chóng)母胞蚴共培養(yǎng)體系,定期觀察、記錄PhfO共培養(yǎng)組和對(duì)照組母胞蚴的生長(zhǎng)發(fā)育情況,測(cè)量其體長(zhǎng)、體寬,計(jì)算各組母胞蚴的體積和存活率,同時(shí)檢測(cè)各組母胞蚴ATP代謝水平的變化。采用分子克隆方法,構(gòu)建PET28（a）-Sjald的重組表達(dá)質(zhì)粒,原核表達(dá)ALD蛋白,蛋白純化后免疫家兔,獲得ALD免疫血清。免疫熒光組織化學(xué)染色檢測(cè)ALD蛋白在母胞蚴體內(nèi)的分布和表達(dá)。培養(yǎng)第3、4、5和8天,re... 

【文章來(lái)源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PhfO共培養(yǎng)第3天和8天的日本血吸蟲(chóng)母胞蚴Figure1MothersporocystsofS.japonicumculturedwith1%PhfO(Coculture)onthe3rdand8thday

PET28a(+)-Sjald重組表達(dá)質(zhì)粒陽(yáng)性克隆的篩選M:DNAMarkerDL2000；1-10：陽(yáng)性克隆片段

rSjALD兔免疫血清的多克隆抗體滴度檢測(cè)A-H：依次為1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400、1:12800、1:25600

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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