發(fā)布時間：2022-01-02 02:47

　　泛素-蛋白酶體途徑（UPP）是一種可逆的、存在于真核細(xì)胞中的蛋白質(zhì)選擇性降解的主要途徑,決定泛素化過程特異性的泛素連接酶E3在調(diào)節(jié)植物逆境脅迫或應(yīng)激反應(yīng)等方面起著至關(guān)重要的作用。本課題組在前期的RNA-seq研究中發(fā)現(xiàn)馬鈴薯RING型泛素連接酶基因StRFP2在干旱脅迫下顯著上調(diào)。本研究通過亞細(xì)胞定位確定了StRFP2基因在細(xì)胞中的表達(dá)部位;利用qRT-PCR檢測馬鈴薯中StRFP2基因的組織特異性表達(dá)以及干旱脅迫響應(yīng);通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法獲得StRFP2基因的過表達(dá)和干擾表達(dá)的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯,進(jìn)一步分析其抗旱性,從而為深入解析其抗旱機理提供基礎(chǔ)。取得了如下主要研究結(jié)果:1.通過同源重組的方法構(gòu)建pCEGFP-StRFP2融合蛋白瞬時表達(dá)載體,由農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化到煙草中,用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)StRFP2蛋白主要定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。2.通過qRT-PCR分析溫室下的馬鈴薯盆栽苗“Atlantic”和“Qingshu 9”中StRFP2基因的組織特異性表達(dá)和干旱脅迫響應(yīng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)StRFP2基因在兩個品種的根、莖、葉中存在差異性表達(dá),在葉中的表達(dá)量均最高;在“Atlantic”中... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

泛素/26S蛋白酶體途徑[72]

馬鈴薯StRFP2基因的遺傳轉(zhuǎn)化及其抗旱性研究17表2.3StRFP2蛋白的互作蛋白Table2.3InteractionproteinsofStRFP2protein互作蛋白PredictedFunctionalPartners類型TypePGSC0003DMT400013613SNF2domain-containingprotein/helicasedomain-containingprotein/RINGfingerdomain-containingprotein.PGSC0003DMT400003284ProteinP21PGSC0003DMT400024491Conservedgeneofunknownfunction.PGSC0003DMT400095598HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400095511HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400094080HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400090890HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400088248HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400093060E3ubiquitin-proteinligaseUPL5PGSC0003DMT400088656E3ubiquitin-proteinligaseUPL5圖2.1StRFP2的蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)Fig.2.1StRFP2proteininteractionnetwork2.3.2StRFP2基因的克隆通過PCR得到StRFP2基因的擴增產(chǎn)物，用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果顯示其片段大小約為1437bp（圖2.2），這與預(yù)期的目的片段大小相符。

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文18圖2.2StRFP2基因的PCR擴增M：DL2000marker；1：StRFP2基因Fig.2.2PCRamplifiedStRFP2geneM:DL2000marker;1:StRFP2gene2.3.3pCEGFP-StRFP2載體的酶切鑒定重組質(zhì)粒pCEGFP-StRFP2經(jīng)NcoΙ酶切驗證結(jié)果顯示（圖2.3），小片段在1473bp左右有明顯條帶，符合目的基因預(yù)期結(jié)果，經(jīng)測序未發(fā)生任何突變，將其瞬時表達(dá)載體質(zhì)粒命名為pCEGFP-StRFP2。圖2.3pCEGFP-StRFP2質(zhì)粒的酶切鑒定M：DL2000marker；1：pCEGFP-StRFP2質(zhì)粒Fig.2.3IdentificationofpCEGFP-StRFP2byrestrictiondigestionM:DL2000marker;1:pCEGFP-StRFP2carrier2.3.4pCEGFP-StRFP2融合蛋白的熒光檢測通過農(nóng)桿菌侵染煙草葉片來觀察pCEGFP-StRFP2融合蛋白在細(xì)胞中的瞬時表達(dá)情況（pCEGFP空載體作為陰性對照），結(jié)果發(fā)現(xiàn)pCEGFP-StRFP2融合蛋白主要在細(xì)胞膜上表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)中也有微弱的綠色熒光，在細(xì)胞核中不表達(dá)，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3563316