為應(yīng)用PET15b-GFP觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)等功能奠定基礎(chǔ),研究綠色熒光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）的基因克隆及其在不同種培養(yǎng)基條件下不同種感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞中的表達(dá)狀況,通過克隆提純PET15b-GFP質(zhì)粒,將已插入單鏈抗體3E3和152的重組質(zhì)粒pET15b-3E3-GFP和pET15b-152-GFP,運用轉(zhuǎn)化的方法將重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞中（BL21,B cell,K12）,在不同培養(yǎng)條件下使用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)GFP基因進(jìn)行表達(dá),篩選出表達(dá)最好的并改良表達(dá)能力最弱表達(dá)條件。結(jié)果表明:重組質(zhì)粒pET15b-152GFP-BL21在液態(tài)LB培養(yǎng)基中30℃、0.4mmol/L IPTG、180r/min誘導(dǎo)條件下培養(yǎng)顯色最顯著,在固態(tài)富集酵母培養(yǎng)基中30℃,1mmol/L誘導(dǎo)條件下培養(yǎng)顯色最顯著;表達(dá)能力最弱的重組質(zhì)粒pET15b-152-GFP-B cell在富集酵母液體培養(yǎng)基中25℃、180r/min、0.4mmol/L IPTG的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)表達(dá)綠色熒光最顯著;pET15b-152-GFP-B cell在0 ... 

【文章來源】：貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(09)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

GFP質(zhì)粒提純瓊脂糖電泳結(jié)果

3）不同濃度IPTG誘導(dǎo)條件下綠色熒光顯色情況。從圖6看出，在富集酵母液體培養(yǎng)基中分別加入0mmol/L、0.1mmol/L、0.4mmol/L、1mmol/L IPTG,30℃誘導(dǎo)條件下，pET15b-152GFP-Bcell在綠色熒光蛋白均能表達(dá)綠色熒光，且不同濃度處理間無顯著差異。圖4 30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固態(tài)培養(yǎng)基中的表達(dá)

30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固態(tài)培養(yǎng)基中的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙啟動子雙報告基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J]. 崔力沙,崔博沛,陳磊,吳星,梁爭論,徐艷玲,李克雷.  中國生物制品學(xué)雜志. 2020(07)
[2]靈菌紅素縮合酶PigC在大腸桿菌中表達(dá)條件優(yōu)化[J]. 李景璇,梅曉彤,章龍纓,戚展紅,尤忠毓.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(10)
[3]人B7-2和增強型綠色熒光蛋白融合基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 路靜,楊洪艷,趙軍,黃幼田,趙國強,董子明.  山東醫(yī)藥. 2005(07)
[4]微生物轉(zhuǎn)化過程中利用OD值實時監(jiān)測細(xì)菌生物量變化的研究[J]. 李學(xué)貴,袁生.  南京師大學(xué)報(自然科學(xué)版). 2003(04)
[5]綠色熒光蛋白在大腸桿菌中的克隆及高效表達(dá)[J]. 陸惠萍,周鳳娟,孫樹漢.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 1997(05)

碩士論文
[1]綠色熒光蛋白標(biāo)記的非抗性示蹤載體的構(gòu)建及初步應(yīng)用[D]. 張云龍.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3563048