發(fā)布時間：2022-01-01 23:37

　　為應用PET15b-GFP觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)等功能奠定基礎(chǔ),研究綠色熒光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）的基因克隆及其在不同種培養(yǎng)基條件下不同種感受態(tài)大腸桿菌細胞中的表達狀況,通過克隆提純PET15b-GFP質(zhì)粒,將已插入單鏈抗體3E3和152的重組質(zhì)粒pET15b-3E3-GFP和pET15b-152-GFP,運用轉(zhuǎn)化的方法將重組質(zhì)粒分別導入感受態(tài)的大腸桿菌細胞中（BL21,B cell,K12）,在不同培養(yǎng)條件下使用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導GFP基因進行表達,篩選出表達最好的并改良表達能力最弱表達條件。結(jié)果表明:重組質(zhì)粒pET15b-152GFP-BL21在液態(tài)LB培養(yǎng)基中30℃、0.4mmol/L IPTG、180r/min誘導條件下培養(yǎng)顯色最顯著,在固態(tài)富集酵母培養(yǎng)基中30℃,1mmol/L誘導條件下培養(yǎng)顯色最顯著;表達能力最弱的重組質(zhì)粒pET15b-152-GFP-B cell在富集酵母液體培養(yǎng)基中25℃、180r/min、0.4mmol/L IPTG的條件下誘導培養(yǎng)表達綠色熒光最顯著;pET15b-152-GFP-B cell在0 ... 

【文章來源】：貴州農(nóng)業(yè)科學. 2020,48(09)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

GFP質(zhì)粒提純瓊脂糖電泳結(jié)果

3）不同濃度IPTG誘導條件下綠色熒光顯色情況。從圖6看出，在富集酵母液體培養(yǎng)基中分別加入0mmol/L、0.1mmol/L、0.4mmol/L、1mmol/L IPTG,30℃誘導條件下，pET15b-152GFP-Bcell在綠色熒光蛋白均能表達綠色熒光，且不同濃度處理間無顯著差異。圖4 30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固態(tài)培養(yǎng)基中的表達

30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固態(tài)培養(yǎng)基中的表達

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]綠色熒光蛋白標記的非抗性示蹤載體的構(gòu)建及初步應用[D]. 張云龍.吉林農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3563048