紫蘇是一種食藥同源的油料作物。紫蘇種子含油量高達(dá)45-55%,其中α-亞麻酸(ALA,18:3Δ^9,12,13)含量約55%-65%。ALA是一種健康有益型脂肪酸,在促進(jìn)人體大腦發(fā)育和保護(hù)心血管系統(tǒng)等方面具有非常重要的作用。本研究采用分子克隆技術(shù)從紫蘇發(fā)育種子分離三酰甘油（triacylglycerol,TAG）合成關(guān)鍵酶基因PfDGAT1（diacylglycerol acyltransferase 1）和PfDGAT2（diacylglycerol acyltransferase 2）,并分析這兩個(gè)基因在紫蘇不同組織器官和種子發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)譜。構(gòu)建這兩個(gè)基因的表達(dá)載體,并分別轉(zhuǎn)化釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和普通煙草（Nicotiana tobaccum,Sumsun NN（SNN））,以鑒定這兩個(gè)基因的生物學(xué)功能。本研究將為深入解析紫蘇油脂合成調(diào)控機(jī)制和油脂品質(zhì)遺傳改良提供科學(xué)基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.基于紫蘇轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),鑒定獲得PfDGAT1和PfDGAT2基因轉(zhuǎn)錄本。定量PCR分析顯示,PfDGAT1和PfDGAT2... 

【文章來(lái)源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

紫蘇植株形態(tài)

11紫蘇不同組織器官的取材方法如下：根：根系樣品取于水培苗。挑選籽粒飽滿的‘晉紫蘇1號(hào)’和‘并紫蘇1號(hào)’種子，蒸餾水沖洗干凈后用0.01%的升汞溶液浸泡8-10min，無(wú)菌水沖洗3-4次，將種子放于鋪有滅菌濾紙的培養(yǎng)皿中，加入適量蒸餾水使濾紙保持濕潤(rùn)，置于光照培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)使紫蘇種子萌發(fā)。側(cè)根長(zhǎng)出后將幼苗移至1/2MS培養(yǎng)液中，用泡沫板固定后繼續(xù)培養(yǎng)，待幼苗的根長(zhǎng)到6-10cm左右時(shí)進(jìn)行取材，放入無(wú)RNA酶的EP管中，液氮速凍5min后保存于﹣80℃超低溫冰箱備用。莖、葉、花和種子均取自種植于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)站的紫蘇植株。待紫蘇生長(zhǎng)旺盛時(shí)，取植株頂端幼嫩的莖、葉，液氮速凍后存于﹣80℃冰箱。盛花期開(kāi)始掛牌標(biāo)記花朵，分別取花和不同發(fā)育時(shí)期（開(kāi)花后10、20、30、40d）的種子，放入無(wú)RNA酶的EP管中，液氮速凍后存于﹣80℃冰箱。圖2-2a‘晉紫蘇1號(hào)’不同組織Fig.2-2aDifferenttissuesof‘Jinzisu1’

12圖2-2b‘并紫蘇1號(hào)’不同組織Fig.2-2bDifferenttissuesof‘Bingzisu1’2.1.2主要試劑EASYspin植物RNA快速提取試劑盒（RN09，購(gòu)于艾德萊生物公司），5XAll-In-OneMasterMix(withAccuRTGenomicDNARemovalKit)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（購(gòu)于ABM公司），EvaGren2XqPCRMasterMix熒光定量PCR試劑盒（購(gòu)于ABM公司），SanTaqPCRMix（購(gòu)于生工生物科技股份有限公司），DEPC（購(gòu)于Biotopped公司），Nuclease-freeH2O、ddH2O等。2.1.3主要儀器高壓蒸汽滅菌鍋（AutoclaveGI80TW）；普通PCR擴(kuò)增儀（BIOER）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Bio-RAD）；各種劑量的移液槍?zhuān)‥ppendrof）；小型離心機(jī)（eppendorf、Centrifuge5424R）；漩渦振蕩儀；金屬浴；瓊脂糖凝膠電泳儀（DYY-7C/8C型）；BioDrop蛋白核酸分析儀；紫外凝膠成像系統(tǒng)（Bio-rad）等。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2種提取靈芝菌絲體基因組DNA方法的比較[J]. 孫墨可,李曉薇,張曼,田娟,董玉迪.  安徽農(nóng)學(xué)通報(bào). 2018(21)
[2]紫蘇PfDGAT2基因生物信息學(xué)及表達(dá)特性分析[J]. 梁倩,李璐,周雅莉,安茜,王計(jì)平.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(05)
[3]高粱苯丙氨酸解氨酶（SbPAL）編碼蛋白的生物信息學(xué)分析[J]. 張曉瑛,劉寶玲,郝青婷,薛金愛(ài).  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(11)
[4]煙草orf25基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 陶瑤,饒文平,吳凌敏,謝麗娟,聶亞平,鐘思榮,王建革,劉齊元.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(05)
[5]蒺藜苜蓿DGAT1基因的克隆和功能鑒定[J]. 徐榮華,崔濤,王建才,苗永美,錢(qián)立生,胡慶森.  西北植物學(xué)報(bào). 2016(10)
[6]甘藍(lán)型油菜磷脂二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶（BnPDAT1）cDNA的克隆和功能鑒定[J]. 譚太龍,馮韜,羅海燕,彭燁,劉睿洋,官春云.  作物學(xué)報(bào). 2016(05)
[7]紫蘇種子脂肪酸代謝及關(guān)鍵酶基因調(diào)控油脂合成規(guī)律的研究[J]. 王計(jì)平,張玲慧,趙靜,王彥尊,李潤(rùn)植.  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2016(03)
[8]紫蘇的研究進(jìn)展[J]. 張曉彬,姜文鑫,張琳,王曉飛,崔玲玉.  食品研究與開(kāi)發(fā). 2015(07)
[9]紫蘇DGAT1基因克隆及四尾柵藻表達(dá)載體構(gòu)建[J]. 王瑩瑩,劉玉,姬妍茹,張正海,周廣麒,劉宇峰.  生物技術(shù)通報(bào). 2014(05)
[10]陸地棉GhDGAT1基因干涉載體構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 劉正杰,張園,王玉美,梁偉,華金平.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(05)

碩士論文
[1]過(guò)表達(dá)蓖麻RcWRI1提高煙葉油脂積累[D]. 吉夏潔.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]紫蘇種子脂肪酸代謝及合成相關(guān)基因PfPDAT的功能分析[D]. 李璐.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]紫蘇FAD3/FAD7基因種子特異性表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 白瑞英.重慶師范大學(xué) 2016
[4]紫蘇PfPDAT基因克隆、表達(dá)特性及單核苷酸多態(tài)性分析[D]. 趙靜.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]花生油脂代謝關(guān)鍵基因在酵母和聚球藻中表達(dá)及功能驗(yàn)證[D]. 孫嬌嬌.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2014
[6]紫蘇種子油脂代謝及限速酶DGAT1基因的表達(dá)分析[D]. 張玲慧.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[7]玉米苗期干旱脅迫下可變剪接及其調(diào)控因子的研究[D]. 李嬌.鄭州大學(xué) 2013
[8]花生二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶（DGAT）基因的克隆與分析[D]. 王龍龍.山東師范大學(xué) 2010
[9]類(lèi)胡蘿卜素提取及其穩(wěn)定性的研究[D]. 劉緒廣.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[10]紫蘇對(duì)黃曲條跳甲控制作用的初步研究[D]. 梁宏衛(wèi).廣西大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3560079