[目 的]探究BCP區(qū)及S區(qū)變異和HBsAg、HBsAb雙陽(yáng)的相關(guān)性及ntA1762T/G1764A和I126T聯(lián)合變異對(duì)HBV生物學(xué)特性的影響。[方 法]本研究第一部分收集共250例慢性乙型肝炎患者的血清樣本進(jìn)行測(cè)序,以HBsAg和HBsAb雙陽(yáng)性的123例患者為實(shí)驗(yàn)組,僅HBsAg陽(yáng)性的127例患者作為對(duì)照組,比較兩組在B基因型和C基因型之間分布的差異、BCP區(qū)nt519-853片段和S區(qū)nt1655-2014片段的突變情況及聯(lián)合突變與HBsAg、HBsAb雙陽(yáng)的相關(guān)性。第二部分根據(jù)第一部分和前期的研究結(jié)果,以堿基位點(diǎn)ntA1762T/G1764A雙突變和氨基酸位點(diǎn)aaI126T（對(duì)應(yīng)ntT531C突變）突變的聯(lián)合變異組為實(shí)驗(yàn)組,野生型、ntA1762T/G1764A雙突變或aaI126T（ntT531C）突變?yōu)閷?shí)驗(yàn)對(duì)照組,體外構(gòu)建含1.2倍HBV基因組的重組質(zhì)粒,將目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)肝癌細(xì)胞內(nèi)表達(dá),檢測(cè)轉(zhuǎn)染成功后的表達(dá)產(chǎn)物水平并分析結(jié)果。[結(jié) 果]1.在250例HBV感染患者中,單陽(yáng)組（127例）和雙陽(yáng)組（123例）在年齡、病毒載量HBV-DNA上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.252... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１－１?ＰＣＲ含５３丨位點(diǎn)基因分型片段電泳膠圖（引物４５６Ｆ，約６５０ｂｐ，?２０００?ＤＮＡｍａｒｋｅｒ）??

結(jié)果如下：??２５Ｄ?２６０?２７§?．甲??？?ｉｒｓｉｓｌａｔｓ?？ｒｓｎｓｅｎｓｉｉｓ?ＳＣ：ＩＺ：Ｉｌ３Ｊｋ：＾ＡｋＳｌＹｒ＾？Ｔｌｉ：：ＪｉＢＪ￡ＩＣＣＩ：：Ｃ￡：ｋｌ??姐，輝繼?ｐ?＇?＾ＺＺｌＺＺｌｌｃｌｌＺｌｌｌ?ｃｌ：?Ｚｌｌｌ－ｋｌＺＺｌｌ?ｃｌ?ＺＩＺＺＩＺＺ?ＺＺＺ?ｌ＇：??ｃＺＺＪＺＺｌｌｃＩ＾Ｚｌｌｌ＾ｌＺＺＺＩＵｉｌＺＺｌｌｃＪＺＪＺＺｌＺＺＺＺＺｌ．??ＺＺＺｌＺＺｌｌｃＩｌＺｌｌｌＳｌＺＺｌｌｌｌｌＺＺｌｌＺｌＺｌＺＺｌＺＺＺＺＺｋ：??圖２．１．１四種質(zhì)粒ＢＧＨ引物片段（含１７６２／１７６４位點(diǎn)）??３５＃?３§§?獅?４１；???????????Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ｔ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??？?Ｉｒ￡３５ｌ２＾￡?？??於？ｎ－ｎ＿Ｆ６ｃ？＿ｒｓＨＨ５Ｍ：ｒ－ａ５Ｋ＿：５ｉ＞ｍ—Ｈ?２：盂孟：盂ｍ：至孟??圖２．１．１四種質(zhì)粒６０Ｆ引物片段（含５３１位點(diǎn)）??４４??

各質(zhì)粒用滅菌蒸餾水稀釋質(zhì)粒濃度均為５００ｎｇ／ＭＬ，為更好進(jìn)行下一步轉(zhuǎn)染??實(shí)驗(yàn)，置－２０°Ｃ冰箱暫存。??２．２獲得目的質(zhì)粒??由此可獲得四組質(zhì)粒，其突變的變異情況如下表所示：??表２．２．１四種質(zhì)粒對(duì)應(yīng)位點(diǎn)突變情況??質(zhì)粒組號(hào)?５３１?１７６２?１７６４?對(duì)應(yīng)突變意義??Ａ?Ｃ?ＡＧ?５３１?突變??Ｂ?Ｔ?Ｔ?Ａ?１７６２／１７６４?突變??Ｃ?ＴＡＧ?野生型??Ｙ?Ｃ?Ｔ?Ａ?５３１及丨７６２／１７６４聯(lián)合突變??四種質(zhì)粒濃度均為５００ｎｇ／｜ａＬ，將獲得的質(zhì)粒進(jìn)行下一步轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。??３．高倍顯微鏡下細(xì)胞轉(zhuǎn)染后形態(tài)??在１０Ｃ０的高倍倒置相差顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染２４小時(shí)后的細(xì)胞形態(tài)如下：??■■??圖３．１轉(zhuǎn)染Ａ質(zhì)粒４８ｈ后的細(xì)胞（Ａ組）圖３．２轉(zhuǎn)染Ｂ質(zhì)粒４８ｈ后的細(xì)胞（Ｂ組）??■■??圖３．３轉(zhuǎn)染Ｃ質(zhì)粒４８ｈ后的細(xì)胞（Ｃ組）?圖３．４轉(zhuǎn)染Ｙ質(zhì)粒４８ｈ后的細(xì)胞（Ｙ組）??４５??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3559312