目的:探究脂聯(lián)素（APN）基因修飾對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）活性的影響及其機(jī)制。方法:無(wú)菌條件采集3-4周齡SD大鼠脛骨和股骨的骨髓,利用Ficoll-Paque PLUS溶液進(jìn)行密度梯度離心分離骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞,用EGM-2 Bulletkit培養(yǎng)基定向誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞分化為EPC。通過(guò)觀察形態(tài)、免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD34鑒定EPC。以大鼠EPC細(xì)胞的RNA為模板,PCR擴(kuò)增出攜帶NheⅠ、XmaⅠ酶切位點(diǎn)的大鼠APN基因,重組到pLKIRG載體中,得到pLKIRG-APN載體,通過(guò)NheⅠ、XmaⅠ雙酶切檢測(cè)和Sanger法測(cè)序鑒定pLKIRG-APN慢病毒真核表達(dá)載體。pLKIRG-APN和pLKIRG分別與慢病毒包裝質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)293T細(xì)胞,分別獲得對(duì)照慢病毒（LV-NC）和過(guò)表達(dá)APN慢病毒（LV-APN）,利用qPCR Lentivirus Titration Kit檢測(cè)慢病毒滴度。LV-NC和LV-APN分分別感染EPC細(xì)胞48 h,0.1μg/μl嘌呤霉素連續(xù)篩選3 d,分別收集LV-APN感染組細(xì)胞（EPC-APN）和LV-NC感染組細(xì)胞（EPC-NC）。分別通過(guò)qPC... 

【文章來(lái)源】：廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,48(05)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

骨髓中分離出的單個(gè)核細(xì)胞在培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)（×100)

免疫熒光檢測(cè)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD34

CCK8結(jié)果顯示，在4 h時(shí)EPC-APN與EPC-NC的吸光度沒有顯著差異，在24、48 h和72 h時(shí)EPC-APN的吸光度顯著增加，分別比EPC-NC的增加23.8%、10.9%和8.8%（圖5），這表明在24、48 h和72 h時(shí)EPC-APN的增殖能力比EPC-NC的顯著增加。圖4 APN過(guò)量表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]球狀脂聯(lián)素對(duì)卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及管狀結(jié)構(gòu)形成的影響[J]. 陳雷,盧小圣,李雅蘭,毛周飛,肖鑾娟,禹艷紅.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(05)



本文編號(hào)：3556001