珠子參為五加科人參屬植物,在我國(guó)有悠久的藥用歷史,以其根莖入藥。珠子參藥材主要分布于云貴、四川、陜西等地,具有抗炎、祛瘀止痛、抗腫瘤、止血、抗氧化等功效。珠子參皂苷是珠子參的主要活性成分,由達(dá)瑪烷型和齊墩果烷型三萜皂苷組成。目前,珠子參藥材多為野生品,其生長(zhǎng)周期長(zhǎng),一般生長(zhǎng)6-7年方能入藥,供需矛盾突出。有必要利用現(xiàn)代分子生物學(xué)及基因工程技術(shù)研究珠子參皂苷的生物合成途徑,進(jìn)而開展珠子參皂苷的合成生物學(xué)研究。本研究首先利用異硫氰酸胍法提取了珠子參愈傷組織的總RNA,并將其反轉(zhuǎn)錄形成了cDNA,并以此cDNA為模板,通過同源克隆的方法成功獲得PjFPS基因的全長(zhǎng)序列（KP684141）,對(duì)該序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,構(gòu)建了pGEM-T-Pj FPS克隆載體和植物過表達(dá)載體pCMBIA1300s-Pj FPS。通過根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將Pj FPS轉(zhuǎn)化到野生型珠子參細(xì)胞中,獲得陽性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;依據(jù)同樣的方法又將Pj FPS轉(zhuǎn)化到過表達(dá)β-AS基因的珠子參細(xì)胞中,并成功獲得陽性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、比色法及皂化法等技術(shù)測(cè)定了轉(zhuǎn)FPS基因陽性細(xì)胞系中Pj FPS基因的相對(duì)表達(dá)量、FPS酶... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

珠子參中的齊墩果烷型三萜及其皂苷類化合物結(jié)構(gòu)

參皂苷 IVa 甲酯結(jié)構(gòu)如圖 1.2 所示。圖 1.2 珠子參中的齊墩果烷型三萜皂苷（A: 竹節(jié)參皂苷 IVa，B：竹節(jié)參皂苷 Iva 甲酯）Fig. 1.2 The structure of oleanane-type saponins in Panax japonicus(A: ChikusetsusaponinIVa, B: Chikusetsusaponin IVa methyl ester)達(dá)瑪烷型三萜皂苷

珠子參中的齊墩果烷型三萜皂苷（A:竹節(jié)參皂苷IVa，B：竹節(jié)參皂苷Iva甲酯）

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3550890