目的:晝夜節(jié)律廣泛存在于所有的哺乳動物,生物鐘是調(diào)控該節(jié)律的內(nèi)源性起搏點。核心鐘基因主要包括Bmal1、Clock、Per、Cry、Rev-erbα和RORα,并形成復(fù)雜的調(diào)控環(huán)路,協(xié)同參與形成周期性節(jié)律。骨骼肌具有晝夜節(jié)律,核心鐘基因和肌調(diào)節(jié)因子參與調(diào)節(jié)骨骼肌的發(fā)育成熟,但其具體機制有待進(jìn)一步研究證實。晝夜節(jié)律紊亂和眾多疾病相關(guān),如癌癥,尤其是惡液質(zhì)的晚期癌癥患者會出現(xiàn)脂肪組織和骨骼肌不斷分解消耗,持續(xù)體重下降并伴發(fā)有炎癥反應(yīng)。炎性刺激條件下鐘基因和骨骼肌萎縮之間的關(guān)系也尚不清楚。本研究擬用RT-PCR和Western blot等方法觀察核心鐘基因在不同胎齡小鼠胚胎和C2C12成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的時空表達(dá)特點,分析骨骼肌發(fā)育分化過程中Bmal1、Clock和肌調(diào)節(jié)因子之間的關(guān)系;觀察LPS炎性刺激對C2C12成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中鐘基因和骨骼肌發(fā)育分化相關(guān)基因的影響,闡明炎性刺激抑制肌管融合可能的機制。方法:1.收集胎齡10¹7d ICR小鼠全胚胎和C2C12成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化不同時間細(xì)胞的RNA,反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板,定量RT-PCR分析5個核心鐘基因Bma...

【文章來源】： 山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：59 頁

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摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表(Abbreviation)
縮寫名詞附表
前言
第一部分 鐘基因Bmal1、Clock參與調(diào)節(jié)骨骼肌的發(fā)育分化
    1 實驗材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 主要試劑的配制
        2.2 動物飼養(yǎng)及取材
        2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化
        2.4 總RNA的提取純化、反轉(zhuǎn)錄和分析
        2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及結(jié)果分析
        2.6 細(xì)胞總蛋白的提取、Western blot分析
        2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 核心鐘基因在不同胎齡小鼠胚胎的表達(dá)
        3.2 肌調(diào)節(jié)因子MyoD和 myogenin在不同胎齡小鼠胚胎的表達(dá)
        3.3 核心鐘基因在C2C12 成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的表達(dá)
        3.4 肌調(diào)節(jié)因子MyoD和 myogenin在 C2C12 成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的表達(dá)
        3.5 C2C12 成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中,BMAL1、CLOCK和 MYOD蛋白的表達(dá)變化
    4 討論
        4.1 小鼠胚胎發(fā)育過程中,核心鐘基因參與骨骼肌的發(fā)育分化
        4.2 核心鐘基因參與C2C12 成肌細(xì)胞分化
        4.3 鐘基因Bmal1、Clock與肌調(diào)節(jié)因子MyoD之間的關(guān)系
第二部分 LPS炎性刺激對C2C12 成肌細(xì)胞分化的影響
    1 實驗材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 主要試劑的配制
        2.2 細(xì)胞誘導(dǎo)分化與實驗分組
        2.3 總RNA的提取純化、反轉(zhuǎn)錄和分析
        2.4 細(xì)胞總蛋白的提取、Western blot 分析
        2.5 圖像采集
    3 結(jié)果
        3.1 LPS炎性刺激對C2C12 成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響
        3.2 LPS炎性刺激對C2C12 成肌細(xì)胞分化過程中骨骼肌發(fā)育分化相關(guān)基因的表達(dá)影響
        3.3 LPS炎性刺激對C2C12 成肌細(xì)胞分化過程中鐘基因的表達(dá)影響
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鐘基因在不同胎齡小鼠胚胎和孕鼠的表達(dá)規(guī)律 [J]. 閆銀弟,羅旭光,楊艷萍,李海榮,崔慧林,曹錫梅.  中國組織工程研究. 2019(01)
[2]骨骼肌晝夜節(jié)律分子鐘機制的研究進(jìn)展 [J]. 閆銀弟,羅旭光,楊艷萍,李海榮,曹錫梅.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2018(07)
[3]哺乳動物生物鐘的遺傳和表觀遺傳研究進(jìn)展 [J]. 岳敏,楊禹,郭改麗,秦曦明.  遺傳. 2017(12)



本文編號：3546760