發(fā)布時(shí)間：2021-12-08 22:03

　　目的:研究Survivin對(duì)Eca-109細(xì)胞自噬溶酶體形成相關(guān)蛋白的調(diào)控。方法:選用雷帕霉素(RAPA)構(gòu)建自噬誘導(dǎo)模型,使用Survivin(SVV)過表達(dá)質(zhì)粒、SVVshRNA質(zhì)粒、Survivin的抑制劑YM155等對(duì)自噬模型進(jìn)行干預(yù)。本實(shí)驗(yàn)中選用激光共聚顯微鏡,觀察自噬體及自噬進(jìn)展變化;選用Western blot法檢測(cè)自噬溶酶體形成過程相關(guān)基因蛋白水平上的表達(dá)變化;選用免疫熒光染色法檢測(cè)溶酶體pH值及細(xì)胞中Cathepsin-D的分布特點(diǎn)。結(jié)果:1)通過RAPA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染了mRFP-eGFP-LC3質(zhì)粒的Eca-109細(xì)胞后,激光共聚焦顯微鏡可觀察該細(xì)胞中綠色熒光明顯增多(P<0.05),即自噬體增多;Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,LC-I、LC-II的蛋白表達(dá)量呈現(xiàn)升高的趨勢(shì),LC-I/LC-II的比值減少,p62表達(dá)量下降,自噬增強(qiáng);2)在Eca-109細(xì)胞自噬模型中,SVV過表達(dá)后,Rab7、LC3蛋白表達(dá)量增加(P<0.05),ATG5蛋白表達(dá)量下降、ATG16L1蛋白表達(dá)量變化不明顯。當(dāng)SVVshRNA及YM155干預(yù)后,Rab7蛋白表達(dá)量增加,...

【文章來源】： 新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：58 頁

【文章目錄】：
中英文縮略詞對(duì)照表
摘要
Abstract
前言
研究?jī)?nèi)容與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 試劑設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.2 感受態(tài)細(xì)菌轉(zhuǎn)化
        2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、抽提
        2.4 抑制劑濃度的選擇
        2.5 自噬模型建立
        2.6 脂質(zhì)體電轉(zhuǎn)染
        2.7 圖片采集(激光共聚焦)
        2.8 細(xì)胞凋亡
        2.9 免疫印跡(Western blot)
    3 質(zhì)量控制
    4 統(tǒng)計(jì)方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]mTORC2/mTORC1抑制劑誘導(dǎo)骨髓增生異常綜合征/白血病細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡及作用機(jī)制研究[D]. 岳青芳.華中科技大學(xué). 2015
[4]磷酸化調(diào)控FUNDC1介導(dǎo)的線粒體自噬研究[D]. 陳果.南開大學(xué). 2014

碩士論文
[1]食品源性鉛暴露對(duì)細(xì)胞自噬溶酶體通路的損傷及可能機(jī)理研究[D]. 韓苗苗.合肥工業(yè)大學(xué). 2018
[2]Survivin對(duì)腫瘤細(xì)胞自噬溶酶體形成過程相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的研究[D]. 李曉苗.新疆醫(yī)科大學(xué). 2017
[3]上皮性卵巢癌組織中Atg5、Beclin1、P53的表達(dá)及相關(guān)性研究[D]. 曹蒙.鄭州大學(xué). 2016



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