枯草芽孢桿菌在環(huán)境中分布廣泛,主要應(yīng)用于食品、農(nóng)業(yè)及環(huán)保等領(lǐng)域。作為醬香功能菌株生產(chǎn)的產(chǎn)品如醬油、豆醬、豆豉、白酒等醬香類食品都深受消費(fèi)者們的喜愛,迄今為止,枯草芽孢桿菌產(chǎn)醬香的機(jī)制仍然不清。通過對(duì)工業(yè)生產(chǎn)菌株B.subtilis BJ3-2進(jìn)行中高溫（45℃）和中溫（37℃）的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序,對(duì)其差異性進(jìn)行了富集分析,篩選得到多個(gè)基因,最后通過生物信息學(xué)分析篩選得到3個(gè)基因可能與醬香相關(guān),對(duì)其敲除后進(jìn)行醬香功能研究。取得的結(jié)果如下:1、通過前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),對(duì)其表達(dá)量分析、差異基因的GO分析KEGG注釋和富集分析,控制篩選條件Fold-change≧2與FDR≦0.05,在45℃高表達(dá)的基因,初步篩選出15個(gè)差異顯著基因,對(duì)其進(jìn)行綜合分析,獲得出3個(gè)產(chǎn)醬香候選基因,cdoA（半胱氨酸雙加氧酶）、panE（酮泛解酸還原酶）、lspA（脂蛋白信號(hào)肽酶Ⅱ）。2、熒光定量PCR對(duì)B.subtilis BJ3-2在37℃和45℃培養(yǎng)條件下的3個(gè)候選基因cdoA、panE、lspA的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),以16S rRNA作為內(nèi)參基因。結(jié)果顯示,cdoA、panE和lspA在45℃比37℃的表達(dá)量分別增... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pUC18+HLarm+cat+HRarm構(gòu)建示意圖

3、通過限制性內(nèi)切酶(Sal I和Pst I)將從Bacilus subtilis BJ3-2基因組中HRarm和pUC18+HLarm+cat酶切后,連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α,提取得到質(zhì)粒pUC18+HLarm+cat+HRarm。如圖2.2所示(利用軟件SnapGene 5.0.8制作)。lspA雙交換載體的構(gòu)建:

3、通過限制性內(nèi)切酶(Pst I和Hind III)將從Bacilus subtilis BJ3-2基因組中擴(kuò)增HRarm和pUC18+HLarm+cat酶切后,連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α,提取得到質(zhì)粒pUC18+HLarm+cat+HRarm。如圖2.3所示(利用軟件SnapGene 5.0.8制作)。2.2.6.2 PCR擴(kuò)增引物

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
[1]豬源化膿隱秘桿菌強(qiáng)、弱毒株全基因組測(cè)序及HSP100/Clp基因轉(zhuǎn)錄水平差異分析[D]. 田佳琪.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]乳酸乳球菌LspA對(duì)NisI成熟及nisin產(chǎn)量影響的研究[D]. 吳小芳.天津大學(xué) 2018
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