枯草芽孢桿菌在環(huán)境中分布廣泛,主要應用于食品、農(nóng)業(yè)及環(huán)保等領域。作為醬香功能菌株生產(chǎn)的產(chǎn)品如醬油、豆醬、豆豉、白酒等醬香類食品都深受消費者們的喜愛,迄今為止,枯草芽孢桿菌產(chǎn)醬香的機制仍然不清。通過對工業(yè)生產(chǎn)菌株B.subtilis BJ3-2進行中高溫（45℃）和中溫（37℃）的轉錄組進行測序,對其差異性進行了富集分析,篩選得到多個基因,最后通過生物信息學分析篩選得到3個基因可能與醬香相關,對其敲除后進行醬香功能研究。取得的結果如下:1、通過前期轉錄組數(shù)據(jù),對其表達量分析、差異基因的GO分析KEGG注釋和富集分析,控制篩選條件Fold-change≧2與FDR≦0.05,在45℃高表達的基因,初步篩選出15個差異顯著基因,對其進行綜合分析,獲得出3個產(chǎn)醬香候選基因,cdoA（半胱氨酸雙加氧酶）、panE（酮泛解酸還原酶）、lspA（脂蛋白信號肽酶Ⅱ）。2、熒光定量PCR對B.subtilis BJ3-2在37℃和45℃培養(yǎng)條件下的3個候選基因cdoA、panE、lspA的表達量進行檢測,以16S rRNA作為內(nèi)參基因。結果顯示,cdoA、panE和lspA在45℃比37℃的表達量分別增... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pUC18+HLarm+cat+HRarm構建示意圖

3、通過限制性內(nèi)切酶(Sal I和Pst I)將從Bacilus subtilis BJ3-2基因組中HRarm和pUC18+HLarm+cat酶切后,連接并轉化到大腸桿菌DH5α,提取得到質(zhì)粒pUC18+HLarm+cat+HRarm。如圖2.2所示(利用軟件SnapGene 5.0.8制作)。lspA雙交換載體的構建:

3、通過限制性內(nèi)切酶(Pst I和Hind III)將從Bacilus subtilis BJ3-2基因組中擴增HRarm和pUC18+HLarm+cat酶切后,連接并轉化到大腸桿菌DH5α,提取得到質(zhì)粒pUC18+HLarm+cat+HRarm。如圖2.3所示(利用軟件SnapGene 5.0.8制作)。2.2.6.2 PCR擴增引物

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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