現(xiàn)代工業(yè)體系中,淀粉的加工過程是通過添加多種酶制劑逐步水解來完成的,普魯蘭酶作為一種重要的淀粉脫支酶在工業(yè)上主要用于淀粉加工中的糖化反應(yīng),在糖化反應(yīng)時(shí)加入普魯蘭酶,分支點(diǎn)處的α-1,6連接可被普魯蘭酶水解,可以最大限度減少糊精生成量,提高麥芽糖的含量,使淀粉大分子降解效率大幅度提升。本實(shí)驗(yàn)含有從嗜熱菌Thermogota thermarum的普魯蘭酶基因的重組質(zhì)粒出發(fā),設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出含有雙酶切位點(diǎn)的線性基因;選用pPIC3.5k質(zhì)粒作為載體進(jìn)行畢赤酵母胞內(nèi)表達(dá);雙酶切質(zhì)粒和基因后酶連獲得正確轉(zhuǎn)化子;在大腸桿菌中進(jìn)行大量克隆并提取質(zhì)粒,將質(zhì)粒線性化后濃縮純化,并以同源重組整合的方式電轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115基因組中,然后篩選出甲醇利用快速型和高拷貝型的陽性轉(zhuǎn)化子;對該重組菌進(jìn)行了誘導(dǎo),分析了其表達(dá)量。 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè). 2020,(21)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

空載質(zhì)粒與pET21a-TT重組質(zhì)粒電泳檢測M.marker 1.pET21a 2.pET21a-TT

如圖2-2所示，基因的條帶遷移距離相對于Marker條帶的位置符合其序列長度，目的條帶切膠回收后測序結(jié)果正確。證明已經(jīng)成功的擴(kuò)增出含有雙酶切位點(diǎn)的線性普魯蘭酶基因。如圖2-3所示，基因和載體雙酶切之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，目的pulA基因大小是2556 bp，載體大小是9004 bp，對照marker條帶的結(jié)果，基因條帶位置與預(yù)期結(jié)果基本相同，證明基因和載體在大小上基本正確，可以進(jìn)行下一步酶連。圖2-4菌落PCR電泳圖

菌落PCR電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與果蠅C（2）M相互作用的蛋白[D]. 岳珊珊.安徽大學(xué) 2015
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[4]肌肉特異性激酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)[D]. 劉文雯.廣西大學(xué) 2012
[5]畢赤酵母AOX1啟動(dòng)子葡萄糖阻遏相關(guān)基因PpHXS1及甲醇誘導(dǎo)相關(guān)基因PpMPP1、PpTRM1的鑒定[D]. 柏鵬.華東理工大學(xué) 2011



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