背景:致病性鉤端螺旋體感染引起的鉤端螺旋體病是全球流行的人獸共患傳染病,我國(guó)也是該病流行疫區(qū)。肺出血和黃疸是鉤端螺旋體病特征性病變,其中肺彌漫性出血（PDH）病人死亡率高達(dá)50%以上。盡管近年我們發(fā)現(xiàn)致病性問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體（Leptospira interrogans）通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制假血友病因子（vWF）介導(dǎo)的血小板凝聚而導(dǎo)致出血,但鉤端螺旋體病肺出血機(jī)制仍然了解甚少。問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株LA 2144基因產(chǎn)物注釋為SGNH水解酶,SGNH水解酶超家族包括血小板活化因子乙酰水解酶（PAF acetylhydrolase,PAF-AH）和磷脂酶 A2（phosphatidase A2,PLA2）,但 LA 2144 基因產(chǎn)物 PAF-AH 和 PLA2酶活性及其在鉤端螺旋體病肺出血和炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制了解甚少或未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。方法:采用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)致病性問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體賴株LA 2144基因跨膜區(qū)、信號(hào)肽和結(jié)構(gòu)域。構(gòu)建無(wú)信號(hào)肽LA 2144基因原核表達(dá)系統(tǒng),Ni-NTA親和層析法提純目的重組蛋白rLep2144,采用SDS-PAGE檢測(cè)表達(dá)效果和提純情況。采用表面活性劑... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２哺乳動(dòng)物ＰＡＦ－ＡＨ［２８］??

ＰＡＦ能被血小板活化因子乙酰水解酶（ＰＡＦａｃｅｔｙｌｈｙｄｒｏｌａｓｅ，?ＰＡＦ－ＡＨ）水解生成無(wú)??活性的溶血?ＰＡＦ?（ｌｙｓｏ－ＰＡＦ）?［２８＿３Ｇ］。??ＰＡＦ－ＡＨ在哺乳動(dòng)物體內(nèi)主要分為細(xì)胞型Ｉ、ＩＩ型和血漿型（如圖１）：細(xì)胞Ｉ??型是多聚酶，偏好水解底物ｓｎ－２位上的乙�；譃椋欤嵝秃停欤庑�。ｌａ型是異源二??聚體，由２９和３０?ｋＤａ大小的兩個(gè)催化亞基ｃｔｌ和ａ２組成，ｌｂ型是異源三聚體，??由２９和３０?ｋＤａ大小的兩個(gè)具有催化功能的ａｌ和ａ２亞基和４５?ｋＤａ大小的無(wú)催化??功能Ｐ亞基組成，其結(jié)構(gòu)類似于三聚體Ｇ蛋白；細(xì)胞ＩＩ型和血漿型ＰＡＦ－ＡＨ是結(jié)??構(gòu)相似的單體酶，可水解氧化修飾過(guò)的磷脂［２８］；二者具有４３％的氨基酸序列相似??性，大小分別為４３?ｋＤａ和４０?ｋＤａ，但細(xì)胞ＩＩ型ＰＡＦ－ＡＨ缺少血漿型ＰＡＦ－ＡＨ結(jié)構(gòu)??中用于外分泌的Ｎ端５０個(gè)氨基酸殘基及與脂蛋白結(jié)合的區(qū)域。在血液中７０％血漿??型ＰＡＦ－ＡＨ與低密度脂蛋白（ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ?ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，?ＬＤＬ）結(jié)合，３０％血漿型??ＰＡＦ－ＡＨ?與高密度脂蛋白（ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ?ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，?ＨＤＬ）結(jié)合［３１＿３３］。??圖１．２哺乳動(dòng)物ＰＡＦ－ＡＨ［２８］??Ｆｉｇ?１．２?Ｍａｍｍａｌ?ＰＡＦ－ＡＨ??在問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體賴株基因組（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＣ＿０〇４３４２．２）中ＬＡ＿２１４４基因產(chǎn)??物被注釋為ＳＧＮＨ水解酶［３４］。ＳＧＮＨ水解酶超家族包括ＰＡＦ－ＡＨ和ＰＬＡ２。通過(guò)序??列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)

２１４４基因產(chǎn)物結(jié)構(gòu)域??ＬＡＪ２１４４?基因產(chǎn)物擁有?Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ?氧陰離子穴（ｏｘｙａｎｉｏｎ?ｈｏｌｅ）和?Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ??催化三聯(lián)體（ｃａｔａｌｙｔｉｃ?ｔｒａｉｄ）結(jié)構(gòu)，屬于ＳＧＮＨ水解酶超家族（圖２．２）。我們猜測(cè)??其可能的作用機(jī)制為：底物進(jìn)入催化三聯(lián)體口袋后形成四面體復(fù)合物，氧陰離子??洞的氧陰離子可穩(wěn)定四面體復(fù)合物，且其負(fù)電荷結(jié)構(gòu)有利于催化三聯(lián)體發(fā)揮酶切??作用丨５７】。??從圖２．２所示，Ｌ?於ｍｙ?ｓｔｒａｉｎ?Ｌａｉ?ＬＡ＿２１４４基因產(chǎn)物：方框內(nèi)為催化三聯(lián)??體，下劃線加粗為氧陰離子穴。??ＭＡＫＦＬＦＳＩＳＬＬ．ＦＬＦＴＹＣＳＳＬ１ＫＫＳＹＴＤＤＹＳＳＰＮＦＥＣＷＳＧＳＧＦＲＤＳＥＴＦＧＬＹＫＳＡＷＡＥＬＲＮＦＹＫＩＥＮＱＫＩＫ??ＳＡＮＩＶＦＶＧＤ｜ＵＱＩ，ＦＰＫＩ｛ＬＭＱＥＦＰＧＡＶＮＲＧＩＧＧＤＬＴＥＴＬＬＥＲＩＥＥＤＶＬＳＬＮＰＫＶＩＶＬ［ｉＩＧＧＮＤＬＩＱＧＫＣ??ＬＨＩＴＲＴＮＬＮＲＩＬＥＫ?ｔＬＫＦＮＰＮＩＫＩＶＩＬＧＩＰＰＶＲＮＱＴＶＮＲＶＳＰＶＬＮＬＴＷＩＳＩＩＲＰＹＫＮＶＥＦＬＤＧＷＱＦＬＲＥＫ??ＤＲＰＶＬＤＳＥＦＷＰＧＱ§ＫＩ０ＶＮＥＫＡＹＲＡＷＩＨＫＬＫＰＩＬＬＰＹＬ??ＬＡ＿２１４４?ｇｅｎｅ?ｐｒｏｄｕｃｔ?（２４８?ａａ）??１?２５?５０?７５?１００?１２５?１５０?１７５?２００?２２５?２４８??｜ｍＩ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?？?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｊ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?？?ｉ?Ｉ?ｌ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?？?ｉ?ｉ??８０

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3526001